技術實現要素:本發明的目的在于提供利用gm20541基因構建視網膜色素變性疾病模型的方法和應用,采用該構建方法可以得到視網膜色素變性疾病模型,該模型可表現出視網膜色素變性性疾病特征,該模型可用于視網膜色素變性性疾病的研究,可以幫助闡明rp的發病過程及機制,并為該疾病的或預防提供新的靶標。本發明是這樣實現的:方面,本發明實施例提供了一種利用gm20541基因構建視網膜色素變性疾病模型的方法,其包括:敲除目標動物視網膜前體細胞中的基因組中的gm20541基因。znf124是一種編碼鋅指蛋白的新基因。鋅指蛋白是一類具有手指狀結構域的轉錄因子,對基因調控起重要的作用。znf124蛋白可穿過核孔進入核內,作為轉錄因子調控其他基因的表達。目前針對znf124蛋白功能的研究報道并不多,對其功能也知之甚少,znf124與一種先天性系統發育疾病dandy-walker復合征(dandy-walkercomplex,dwc)相關。此外,znf124被認為參與了前體生長因子(vegf)對人造血細胞凋亡的抑制作用,表明znf124在人體生命活動中承擔有重要功能。發明人的另一研究表明,znf124基因突變與rp有關,對探索rp的致病機制有極大幫助。因此,深入研究znf124對視網膜色素變性疾病的及病因探討潛力巨大。臨床上平時不易見到的疾病可用動物隨時復制出來。江蘇小鼠動物模型造模
40mmnaoh,),并在金屬浴100℃加熱1h;(3)取出離心管,冷卻至室溫后,加入100μl的中和液(40mmtris-hcl,),10000g離心2min后,取上清用于小鼠基因型鑒定。(3)pcr擴增:按照如系配置pcr反應體系2×taqmix:10μl尾巴組織裂解液:2μl引物1(gm20541-loxp-forward或six3-cre-forward):1μl(濃度:10mm)引物2(gm20541-loxp-reverse或six3-cre-reverse):1μl(濃度:10mm)ddh2o:6μl。引物序列如下:gm20541-loxp-forward序列:5’-attccccttcaagatagctac-3’;gm20541-loxp-reverse序列:5’-aatgatcaactgtaattcccc-3’;six3-cre-forward序列:5’-gccgccgggatcactctcg-3’;six3-cre-reverse序列:5’-ccagccgccgtcgcaactc-3’。擴增程序:pcr反應體系配制完后,在pcr儀上于95℃預加熱5分鐘使模板dna充分變性,然后進入擴增循環。在每一個循環中,先于95℃保持30秒鐘使模板變性,然后將溫度降到復性溫度58℃,保持30秒,使引物與模板充分退火;在72℃保持30秒,使引物在模板上延伸,合成dna,完成一個循環。重復這樣的循環25次,使擴增的dn段大量累積。,在72℃保持5分鐘,使產物延伸完整,4℃保存。(4)凝膠電泳稱取1g瓊脂糖放于100mltaebuffer中。上海模式動物模型手術可以嚴格控制實驗條件,增強實驗材料的可比性。
gaaaccctatgaatgtaaccaatgtgg660taaagcctttgcatattccaacagtctccaaatacatcaaagaacacacactggagagaa720accctatgaatgtaaccagtgtggtaaagcctttgcatatcacaatagtctccaaataca780taaaagtacacacactggagagaaaccctataaatgtaaccagtgtggtaaagcctttgc840atatcacattactctccgaacacataaaggaacacacactgaagagaaaccctatgaatg900taaccaatgtggtaaagcctttgcatattccaacagtctccaaatacatcaaagaacaca960cactggagagaaaccctatgaatgtaaccagtgtggtaaagcctttgcatatcacaatag1020tctccaaatacataaaagtacacacactggagagaaaccctatgaatgtaaccagtgtgg1080taaagcctttgtatgtagcagtcattttcaaaggcataaaaaaattcatactggagagaa1140accctatgattgtaaccagtgtggtaaagcctttgcatataaaagtaatctccaaattca1200tgaaagaaaacacactggagggaaaccctctgaatgtaattaatgtagtaaagcttttgc1260atttcataatagtttccaaatacataaaagaacacatagtgagagaaaccctatgaatat1320aaccaatgtggtaaaacatttccatatctcagtggtctccgcatttataacagaacacat1380agtggagagaaaccctatggatgtaa1406。
疾病神經系統疾病模型動物抗抑郁對腦突觸體攝取5-HT、NA、DA的抑制作用(樣品篩選、IC50測定)大鼠強迫游泳試驗(大/小鼠,Noduls軟件、視屏分析)大/小鼠小鼠懸尾試驗(Noduls軟件、視屏分析)小鼠5-羥色胺增強試驗小鼠利血平誘導眼瞼下垂試驗小鼠育亨賓毒性增強試驗小鼠高劑量阿撲拮抗小鼠大鼠慢性輕度不可預見性刺激(CUMS)模型大鼠新環境進食抑制實驗大/小鼠小鼠腦內單胺氧化酶MAO-A、MAO-B活性測定小鼠對新生大鼠海馬神經細胞的保護作用(谷氨酸損傷、過氧化氫損傷、缺糖缺氧損傷、損傷等)新生大鼠對SH-SY5Y細胞合成分泌BDNF的作用SH-SY5Y細胞抗驚厥育亨賓毒性增強試驗小鼠戊四唑驚厥小鼠荷包牡丹堿驚厥小鼠印防己驚厥小鼠抗焦慮與戊巴比妥類藥物的協同作用小鼠對巴比妥閾下劑量的影響小鼠再入睡試驗小鼠曠場實驗(大/小鼠,全程攝像監控、軟件處理)大/小鼠大鼠高架十字迷宮法(全程攝像監控、軟件處理)大鼠大鼠穿梭箱法(全程攝像監控、軟件處理)大鼠抗帕金森氏癥抗帕金森氏癥6-羥多巴胺致大鼠帕金森病模型大鼠MPTP模型(雙側損毀PD模型)大/小鼠氧化震顫素致顫模型大/小鼠疼痛。在肝臟中,肝外膽道系統的阻塞會引發膽汁淤積和炎癥,導致門靜脈周圍區域的強烈纖維化反應。
17-高原濕度環境模擬裝置,18-動物行為學遠程觀察單元,19-功能控制面板。具體實施方式為了使本實用新型的目的、技術方案及優點更加清楚明白,以下結合附圖及實施例,對本實用新型進行進一步詳細說明。應當理解,此處所描述的具體實施例用以解釋本實用新型,并不用于限定本實用新型,即所描述的實施例是本實用新型一部分實施例,而不是全部的實施例。通常在此處附圖中描述和示出的本實用新型實施例的組件可以以各種不同的配置來布置和設計。因此,以下對在附圖中提供的本實用新型的實施例的詳細描述并非旨在限制要求保護的本實用新型的范圍,而是表示本實用新型的選定實施例。基于本實用新型的實施例,本領域技術人員在沒有做出創造性勞動的前提下所獲得的所有其他實施例,都屬于本實用新型保護的范圍。需要說明的是,術語“”和“第二”等之類的關系術語用來將一個實體或者操作與另一個實體或操作區分開來,而不一定要求或者暗示這些實體或操作之間存在任何這種實際的關系或者順序。而且,術語“包括”、“包含”或者其任何其他變體意在涵蓋非排他性的包含,從而使得包括一系列要素的過程、方法、物品或者設備不包括那些要素,而且還包括沒有明確列出的其他要素。卵巢切除致骨質疏松大鼠模型。云南大鼠動物模型技術
特發性肺纖維化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是臨床上具有代表性的一種慢性纖維化性肺。江蘇小鼠動物模型造模
轉基因小鼠對黑色素瘤發生的分子途徑的理解有重要意義。此外,轉基因小鼠是可靠且可重現的模型,用來評估受損基因對黑色素瘤生物學的影響。應用:基因工程小鼠模型可用于研究特定基因組改變在黑色素瘤的發生和發展的重要性及藥物的靶向。1Lum-/-基因敲除小鼠Lumican是一種富含亮氨酸的小蛋白聚糖(smallleucine-richproteoglycan,SLRP),為膠原原纖維形成的關鍵調節劑。黑色素瘤中Lumican表達降低與浸潤相關。方法:有研究者利用BamHI建立的克隆衍生物導入胚胎干細胞,建立Lum-/-轉基因小鼠。該模型可提供與發生和轉移相關機制及可見變的進展,以及確定負責的黑色素瘤進展的基因。2Tyr::N-RasQ61K轉基因小鼠方法:有研究者使用突變的人N-RasQ61K和SV40剪接以及聚腺苷酸化序列生成Tyr::N-RasQ61K構建體,并注射到卵母細胞中,建立Tyr::N-RasQ61K轉基因小鼠。3BrafV600E轉基因小鼠模型有研究者使用LoxP-stop-LoxP(LSL)/Cre重組酶技術從內源性Braf基因中誘導BrafV600E表達,建立BrafV600E轉基因黑色素瘤小鼠模型。總結目前已有三種不同的黑色素瘤小鼠模型,但由于實驗動物與人類基因組、基因調控、細胞類型、結構與組成等方面是有一定差別。江蘇小鼠動物模型造模