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Recombinant Human IL-23R Protein

來源: 發(fā)布時(shí)間:2025-02-14

磁珠法在基因克隆中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:1.**質(zhì)粒DNA的提取**:磁珠法可以用于從細(xì)菌細(xì)胞中提取質(zhì)粒DNA,這對(duì)于質(zhì)粒的克隆和表達(dá)至關(guān)重要。通過磁珠法提取的質(zhì)粒DNA純度高,適合用于后續(xù)的酶切、連接、轉(zhuǎn)化等分子克隆步驟。2.**基因組DNA的提取**:磁珠法可以用于從各種生物樣本中提取基因組DNA,這對(duì)于基因組的克隆和分析非常重要。提取的基因組DNA可以用于PCR擴(kuò)增、基因表達(dá)分析、基因突變檢測(cè)等。3.**mRNA的提取和純化**:在mRNA克隆中,磁珠法可以用于提取和純化mRNA,這對(duì)于cDNA的合成和基因表達(dá)分析非常關(guān)鍵。磁珠法提取的mRNA純度高,可以用于后續(xù)的cDNA合成和RT-PCR等實(shí)驗(yàn)。4.**PCR產(chǎn)物的純化**:磁珠法可以用于純化PCR產(chǎn)物,去除反應(yīng)中的酶、dNTPs和其他雜質(zhì),為克隆PCR產(chǎn)物提供高純度的DNA模板。5.**DNA片段的篩選和回收**:在基因克隆過程中,可能需要從多個(gè)DNA片段中篩選出特定大小或序列的片段。磁珠法可以用于DNA片段的篩選和回收,提高克隆效率。6.**自動(dòng)化和高通量操作**:磁珠法易于與自動(dòng)化設(shè)備結(jié)合,適合高通量樣本處理,這對(duì)于大規(guī)模基因克隆項(xiàng)目尤為重要。自動(dòng)化操作減少了人為操作誤差,提高了實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性和可靠性。Pfu DNA Polymerase 適合擴(kuò)增較長的DNA片段,有助于在基因編輯中處理大的基因區(qū)域或復(fù)雜的基因結(jié)構(gòu)。Recombinant Human IL-23R Protein,mFc Tag

Recombinant Human IL-23R Protein,mFc Tag,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

BsuDNAPolymerase(LargeFragment,5U/μL)是一種來源于嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillussubtilis)的DNA聚合酶。這種酶保留了BsuDNAPolymeraseI的5'-3'聚合酶活性,但缺失了5'-3'核酸外切酶結(jié)構(gòu)域,因此它具有鏈置換活性,可以用于重組酶聚合酶擴(kuò)增(RPA)等恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)。以下是BsuDNAPolymerase(LargeFragment,5U/μL)的一些關(guān)鍵特性和應(yīng)用:1.**活性定義**:在37°C條件下,30分鐘內(nèi)將10nmol的dNTP摻入酸不溶性物質(zhì)所需的酶量定義為1個(gè)活性單位(U)。2.**熱失活條件**:75°C,20分鐘。3.**酶保存液成分**:25mMTris-HCl,50mMNaCl,1mMDTT,0.1mMEDTA,50%Glycerol,pH7.4@25°C。4.**儲(chǔ)存條件**:-25~-15°C保存,有效期2年。5.**注意事項(xiàng)**:-由于缺乏3'-5'核酸外切酶活性,BsuDNAPolymerase(LargeFragment)不能切除3'未配對(duì)的突出末端,因而不適用于生成平齊末端。-25°C時(shí)BsuDNAPolymerase(LargeFragment)保留50%的活性,是同溫度下Klenow片段(3'-5'exo-)的兩倍。6.**應(yīng)用**:-隨機(jī)引物法標(biāo)記。-cDNA第二條鏈的合成。-單個(gè)dA的加尾。-鏈置換的DNA合成。Recombinant Human IL-1R2/IL-1 RII/CD121b Protein,His TagT4 DNA 聚合酶是一種模板依賴的 DNA 聚合酶,需要特定的 DNA 模板才能進(jìn)行 DNA 合成反應(yīng)。

Recombinant Human IL-23R Protein,mFc Tag,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

蛋白A-微球菌核酸酶(pA-MNase)是一種特殊的融合蛋白,它結(jié)合了蛋白A和微球菌核酸酶(MNase,MicrococcalNuclease)的特性。以下是pA-MNase的一些關(guān)鍵特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**融合表達(dá)產(chǎn)物**:pA-MNase是蛋白A與微球菌核酸酶MNase的融合表達(dá)產(chǎn)物,因此它同時(shí)具有ProteinA的抗體結(jié)合活性和MNase的核酸內(nèi)切酶活性。2.**雙重功能**:由于其雙重功能,pA-MNase常用于蛋白質(zhì)-DNA相互作用研究,特別是在ChIC(ChromatinImmunocleavage)和CUT&RUN(CleavageUnderTargetsandReleaseUsingNuclease)技術(shù)中。3.**ProteinA的特性**:ProteinA是一種發(fā)現(xiàn)于金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)的細(xì)胞壁表面蛋白,分子量為42kDa,能特異性地與哺乳動(dòng)物免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)結(jié)合,通常結(jié)合部位為免疫球蛋白的Fc區(qū)。4.**微球菌核酸酶(MNase)的特性**:MNase是一種核酸內(nèi)切酶,能夠降解核酸,常用于降解蛋白質(zhì)制備中存在的核酸,減少細(xì)胞裂解液的粘度,以及用于染色質(zhì)結(jié)構(gòu)分析和快速RNA測(cè)序。5.**反應(yīng)條件**:MNase的反應(yīng)條件包括1XMicrococcalNucleaseReactionBuffer,需要補(bǔ)充100μg/ml重組白蛋白,分子生物學(xué)級(jí),并在37°C下孵化。

在質(zhì)粒DNA提取過程中,確保DNA的完整性和活性至關(guān)重要,這通常涉及以下幾個(gè)關(guān)鍵因素:1.**溫和的裂解條件**:選擇適當(dāng)?shù)牧呀夥椒▽?duì)于保持DNA的完整性至關(guān)重要。對(duì)于大于15kb的質(zhì)粒DNA,應(yīng)采用溫和的裂解方法,如將細(xì)菌懸浮于等滲的葡萄糖溶液中,加入溶菌酶和EDTA破壞細(xì)胞壁和細(xì)胞膜,以減少對(duì)質(zhì)粒DNA的機(jī)械剪切力,從而保護(hù)其完整性。2.**避免過度裂解**:在質(zhì)粒提取過程中,并非裂解時(shí)間越長越好。過長的裂解時(shí)間可能會(huì)造成基因組DNA片段的污染,影響質(zhì)粒的純度。3.**適當(dāng)?shù)南礈旌拖疵?*:在純化過程中,適當(dāng)?shù)南礈炜梢匀コ鞍踪|(zhì)和其他雜質(zhì),但過度洗滌可能會(huì)導(dǎo)致DNA的損失。洗脫步驟中,確保洗脫液完全浸潤柱膜,以保證結(jié)合在柱膜上的質(zhì)粒得以充分洗脫,避免因洗脫體積過小而影響質(zhì)粒得率。4.**避免DNA的降解**:在提取過程中,添加核酸酶抑制劑可以防止DNA被核酸酶降解。同時(shí),避免長時(shí)間將DNA暴露在室溫下,以及避免多次凍融循環(huán),這些都有助于保護(hù)DNA的完整性。5.**低溫操作**:盡量在低溫條件下進(jìn)行提取操作,以減少核酸酶的活性,從而保護(hù)DNA的完整性。

在糖蛋白結(jié)構(gòu)分析領(lǐng)域,Endo H 是一種重要的工具酶,通過水解糖蛋白中的特定糖苷鍵,可以將糖鏈切割下來。

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在比較BstDNA聚合酶和TaqDNA聚合酶對(duì)于復(fù)雜DNA片段擴(kuò)增的適用性時(shí),以下是一些關(guān)鍵點(diǎn):1.**TaqDNA聚合酶**:-TaqDNA聚合酶因其高熱穩(wěn)定性和擴(kuò)增效率而被應(yīng)用于常規(guī)PCR。它擴(kuò)增速度為30-60秒/kb,缺乏3'→5'核酸外切酶活性,無校正功能,易產(chǎn)生錯(cuò)配堿基。-對(duì)于結(jié)構(gòu)復(fù)雜的模板,如GC含量高、有二級(jí)結(jié)構(gòu)等,TaqPlus可以用于擴(kuò)增,能有效地?cái)U(kuò)增10kb以下的片段。-有產(chǎn)品如TitaniumTaqDNA聚合酶,它是通過基因工程改造的Taq酶,缺失了5'-3'外切酶活性,具備更強(qiáng)大的擴(kuò)增性能,適合擴(kuò)增高度復(fù)雜的DNA混合物。2.**BstDNA聚合酶**:-BstDNA聚合酶具有高適溫度,能夠適應(yīng)更加苛刻的擴(kuò)增條件,同時(shí)消除DNA二級(jí)結(jié)構(gòu),因而能夠準(zhǔn)確并且均勻地?cái)U(kuò)增全基因組序列。-BstDNA聚合酶大片段能夠優(yōu)先擴(kuò)增短片段的DNA,并且能夠確保擴(kuò)增得到的DNA覆蓋了整個(gè)基因組,連貫并且無偏地?cái)U(kuò)增所有的遺傳位點(diǎn)。-翌圣生物HieffCanace®PlusHigh-FidelityDNAPolymerase基于PfuDNA聚合酶改造而成,其保真性是Taq酶的83倍,Pfu酶的9倍,擴(kuò)增速度高達(dá)10秒/kb,擴(kuò)增目的片段長達(dá)13kb,具有極強(qiáng)的擴(kuò)增效率的模板適應(yīng)性,非常適合復(fù)雜模板的高保真擴(kuò)增。

Tn5 轉(zhuǎn)座酶可用于多種生物體,包括許多革蘭氏陰性菌、革蘭氏陽性菌以及酵母等。Protease-Activated Receptor-4

UBE2L3作為泛素化途徑中的關(guān)鍵酶,其在蛋白質(zhì)降解、信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞周期控制等重要內(nèi)容有著作用。Recombinant Human IL-23R Protein,mFc Tag

在PCR實(shí)驗(yàn)中,除了BsuDNAPolymerase,還有幾種聚合酶適合高溫?cái)U(kuò)增,包括:1.**TaqDNAPolymerase**:這是常用的PCR聚合酶,來源于Thermusaquaticus,能夠在72°C的比較好活性溫度下工作。它具有良好的熱穩(wěn)定性,可以承受PCR的熱變性步驟,且中途不需要再添加酶。2.**PfuDNAPolymerase**:來源于Pyrococcusfuriosus,具有出色的熱穩(wěn)定性和3'→5'外切酶活性,提供校正功能,適用于對(duì)PCR保真性要求較高的實(shí)驗(yàn),如基因篩選、克隆表達(dá)、突變檢測(cè)、定點(diǎn)突變等。3.**VentDNAPolymerase**:來源于Litoralis棲熱球菌,具有3'→5'外切酶活性,可以去除錯(cuò)配的堿基,具有校對(duì)功能,保真度比TaqDNAPolymerase高5~15倍。4.**KODDNAPolymerase**:來自Thermococcuskodakaraensis,具有高保真性和高熱穩(wěn)定性,保真性比PfuDNAPolymerase更高,優(yōu)化后的PCR反應(yīng)緩沖液能使得其擴(kuò)增速度達(dá)到Taq酶的2倍、Pfu酶的5-6倍。5.**BstDNAPolymerase**:來源于Bacillusstearothermophilus,具有3'到5'外切割活性,適用于等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng),如LAMP技術(shù),可在恒溫下進(jìn)行DNA擴(kuò)增,無需繁瑣的溫度循環(huán)。Recombinant Human IL-23R Protein,mFc Tag

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