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Recombinant Human Annexin V/ANXA5 Protein

來源: 發布時間:2024-10-21

EndoS糖苷內切酶S在抗體藥物偶聯物(ADCs)研究中的應用主要體現在糖鏈定點偶聯技術上。通過上海藥物所的研究,開發了一種新穎的糖鏈定點ADC制備策略,利用EndoS2這種糖苷內切酶,可以將小分子細胞毒藥物“一步”定點連接到抗體的糖基化位點,實現了糖鏈定點ADC化合物的制備。定點偶聯技術相比傳統的隨機偶聯具有更好的方法指數,能夠提高ADC的均一性和穩定性,是當前ADC領域的研究熱點之一。在抗體的Fc結構域N297位,這是一個保守的糖基化位點,通過在該位點引入細胞物質,可以形成具有優勢的糖鏈定點ADC化合物(glycosite-specificADCs,gsADCs)。此外,EndoS2對多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性,能夠高效獲得功能修飾的糖工程抗體,并且可以用于抗體的內吞成像研究及糖鏈延伸等功能化研究。研究人員通過這種“一步”制備策略得到的糖鏈定點ADC化合物,在結構均一性、親水性、體外穩定性以及體外活性方面表現良好,并且在體內瘤抑制活性方面,相比陽性對照ADC化合物,在低載藥量的情況下具有更強的抑制效果。EndoS酶的這些應用,不僅展示了其在簡化ADC制備流程中的潛力,還有助于推動定點ADC藥物的深入發展,為未來的生物藥物開發提供了新的思路和方法。Multiplex Probe qPCR Mix 是一種濃縮預混液,含有抗體技術修飾的熱啟動酶Hotstart Taq DNA聚合酶。Recombinant Human Annexin V/ANXA5 Protein,Tag Tag

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通過EndoS糖苷內切酶S進行糖蛋白的糖鏈結構分析通常涉及以下步驟:1.**樣本準備**:首先,需要獲得糖蛋白的純化樣本,以確保分析的準確性。2.**酶的準備**:準備適量的EndoS糖苷內切酶S,根據實驗需要選擇合適的濃度和緩沖體系。3.**酶切反應**:-將糖蛋白樣本與EndoS酶混合,在適宜的條件下(如pH、溫度等)進行酶切反應。-反應時間根據EndoS的活性和所需的切割程度來確定。4.**終止反應**:在達到預期的酶切時間后,通過加熱或添加適當的緩沖液來終止酶切反應。5.**分離純化**:-使用色譜技術(如凝膠滲透色譜、離子交換色譜等)將酶切后的糖蛋白和釋放的糖鏈分離。-純化過程可能需要多步色譜以確保糖鏈的純度。6.**糖鏈分析**:-對分離得到的糖鏈進行進一步的結構分析,可能包括質譜分析、核磁共振(NMR)波譜分析等。-可以使用高分辨率的質譜技術,如MALDI-TOF或ESI-MS,來確定糖鏈的精確質量。7.**序列鑒定**:通過與已知糖鏈數據庫比對,確定糖鏈的序列和結構。8.**功能分析**:研究酶切后的糖蛋白和釋放的糖鏈對生物活性的影響,如結合特性、免疫原性等。9.**數據分析**:收集所有數據并進行綜合分析,以揭示糖鏈結構與功能之間的關系。

Recombinant Mouse MXRA8 Protein,His TagUracil-DNA Glycosylase (UDG) 是一種在DNA修復過程中起作用的酶,其主要功能是識別并去除DNA中的尿嘧啶堿基。

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PreScissionProtease(PSP)是一種由人鼻病毒14型的3C蛋白酶(humanrhinovirus(HRV)type143Cprotease)和GST組成的融合蛋白。它具有以下特點:1.**特異性識別**:PreScissionProtease能在低溫下(4°C)特異識別短肽Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro,并在Gln和Gly氨基酸殘基之間進行酶切。2.**依賴結構**:底物的識別和切割不僅依賴于融合蛋白的一級結構,還依賴于融合蛋白的二級和三級結構。3.**分離GST標簽**:它可以特異性的將pGEX-6P系列等載體表達出的帶有酶底物識別多肽序列融合蛋白的GST標簽進行分離。4.**表達宿主**:本品由大腸桿菌中重組表達,并以無菌液體形式提供。5.**物理性質**:分子量約為46kDa,物理外觀為無菌無色液體。6.**儲存緩沖液**:25mMTris-HCl(pH8.0),150mMNaCl,1mMEDTA,5mMDTT,50%(V/V)Glycerin。7.**酶切緩沖液**:10×酶切緩沖液為500mMTris-HCl(pH7.0),1.5MNaCl,10mMEDTA,10mMDTT。8.**純度**:經SDS-PAGE及HPLC分析,純度大于95%。9.**酶活定義**:在5℃條件下反應16小時,能夠切割10μg的GST標簽的融合蛋白達90%以上所需的酶量定義為一個活性單位。

重組人血清白蛋白(rHSA)在藥物載體應用中提高藥物穩定性和靶向性的機制主要包括以下幾點:1.**延長半衰期**:通過與rHSA融合,可以延長藥物分子在體內的循環時間。例如,阿必魯肽(Tanzeum)是GLP-1與HSA的融合蛋白,其半衰期可延長至5天,每周給藥一次即可。2.**提高穩定性**:rHSA作為載體,可以保護藥物分子不受體內酶解和其他降解因素的破壞,從而提高藥物的穩定性。例如,FGF21與HSA融合后,其體外穩定性升,抗胰蛋白酶降解能力和高溫條件下的穩定性增加。3.**改善藥代動力學**:rHSA融合蛋白能夠改善藥物的藥代動力學特性,如改變藥物的分布和代謝,減少腎臟的損失,從而提高藥物在體內的濃度和療效。4.**增強靶向性**:rHSA可以通過其天然的生物學特性,如與特定受體的結合,增強藥物對特定組織或細胞的靶向性。例如,rHSA可以通過其與FcRn受體的結合,實現對瘤組織的靶向性。5.**降低免疫原性**:rHSA作為一種內源性蛋白質,具有較低的免疫原性,可以減少藥物引起的免疫反應,提高藥物的安全性和耐受性。Cas12a同源物能夠識別更簡單的PAM序列(如5-TTN),這使得基因組的覆蓋率顯著提高。

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NLS-Cas9-EGFPNuclease在基因編輯中提高特異性的策略包括:1.**核定位信號(NLS)**:NLS有助于Cas9蛋白快速定位到細胞核,這可以減少Cas9在細胞質中的非特異性結合,從而降低脫靶效應。2.**瞬時表達**:由于NLS-Cas9-EGFPNuclease是作為蛋白質直接遞送的,它在細胞內不會經歷長時間的表達,這限制了Cas9的活性時間窗口,減少了長時間存在導致的脫靶風險。3.**優化gRNA設計**:精心設計的gRNA可以提高特異性,通過選擇與目標基因特異性匹配的gRNA,可以減少Cas9在非目標位點的切割。4.**使用高保真Cas9變體**:一些Cas9變體被設計為具有更高的特異性,通過突變Cas9蛋白的某些氨基酸,可以降低其在非目標位點的活性。5.**熒光標記(EGFP)**:EGFP標簽不僅用于追蹤和分選,還可以幫助研究者通過熒光激起細胞分選(FACS)富集成功編輯的細胞,從而提高編輯特異性。6.**體外驗證**:在實際進行體內基因編輯之前,可以通過體外DNA切割實驗驗證gRNA的特異性和效率,篩選出比較好的gRNA。7.**使用PAM序列優化**:通過選擇具有限制性PAM序列的gRNA,可以減少可能的脫靶位點。

Hifair? Ⅱ 1st Strand cDNA Synthesis Kit :適用于從總RNA或mRNA模板合成鏈cDNA,具有高熱穩定性。OVA Peptide (257-264)

在泛素化過程中,首先泛素激起酶E1(Uba1或其他)在ATP的存在下激起泛素分子,形成E1-泛素硫酯中間體。Recombinant Human Annexin V/ANXA5 Protein,Tag Tag

使用PreScissionProtease進行蛋白質切割后,可以采用以下方法來提高產品的純度:1.**親和層析**:利用GST標簽或His標簽等進行一步或多步親和層析,以高純度分離目的蛋白。2.**離子交換層析**:根據蛋白質的電荷特性,使用陽離子或陰離子交換層析進一步純化蛋白質。3.**凝膠滲透層析**:通過分子大小的排阻,去除分子量較大或較小的雜質。4.**反向層析**:使用反相高效液相色譜(HPLC)技術,根據蛋白質與固定相的疏水相互作用進行分離。5.**超濾/透析**:使用超濾膜或透析袋去除低分子量的雜質,如鹽分、緩沖液成分或小分子蛋白質。6.**二次親和層析**:在初次親和層析后,可以進行二次親和層析以進一步提高純度。7.**蛋白質純化柱**:使用商業化的蛋白質純化柱,如GST-Sepharose或Ni-NTA柱,進行快速純化。8.**等電聚焦電泳**:通過等電聚焦電泳(IEF)分離具有不同等電點的蛋白質。9.**SDS-PAGE**:使用SDS-PAGE凝膠電泳分析蛋白質的純度,并可通過凝膠切片回收相對純凈的蛋白質條帶。10.**質譜分析**:利用質譜技術鑒定蛋白質的確切質量和序列來確保蛋白質的純度和正確性。Recombinant Human Annexin V/ANXA5 Protein,Tag Tag

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