鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項(xiàng)：將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10PBS，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。B．含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制200ul鼠尾膠原蛋白(5mg/ml)加到（如果反過(guò)來(lái)把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入23ul10PBS10培養(yǎng)液，混勻(混勻后pH左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。加入760ul的細(xì)胞懸浮液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中。將培養(yǎng)器皿在室溫下放20分鐘待膠凝固后，加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。注意事項(xiàng)：在室溫下pH中性時(shí)可迅速成膠，在操作過(guò)程中要盡量保持低溫。鼠尾膠原醋酸溶解：氯仿的量約為膠原溶液的10%。寧波正規(guī)鼠尾膠原廠家

膠原蛋白的提取方法：1.堿法提取：堿法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等。如Holzer等[5]采用1%～1.5%石灰水浸泡的方法提取膠原蛋白。由于它容易造成肽鍵水解，因此得到的水解產(chǎn)物分子量比較低。所以，若想保留膠原的三股螺旋結(jié)構(gòu)，此法不可取。2.鹽法提?。蝴}法提取膠原蛋白所用的中性鹽有鹽酸-三羥甲基胺基甲烷(Tris-HCl)、氯化鈉、檸檬酸鹽等。在中性條件下，當(dāng)鹽的濃度達(dá)到一定量時(shí)，膠原溶解。并且可采用不同濃度的氯化鈉對(duì)提取的膠原蛋白進(jìn)行鹽析處理，可以沉淀出不同類型的膠原蛋白。南京正規(guī)鼠尾膠原廠家直銷整個(gè)操作請(qǐng)?jiān)跓o(wú)菌環(huán)境下無(wú)菌操作，避免污染以影響細(xì)胞生長(zhǎng)。

鼠尾膠原膠凝程序：膠原蛋白I按以下步驟使其pH達(dá)到堿性時(shí)凝膠。1）將無(wú)菌5cm左右的紗布海綿貼在150mm培養(yǎng)皿的蓋子上來(lái)制備氨蒸氣室。用氫氧化銨使紗布飽和，把蓋子放在150mm的培養(yǎng)皿上，暫放置一邊。2）將膠原蛋白I均勻涂布在要包被物的表面上，厚度可以根據(jù)需要改變，膠原蛋白I（50-100μL）足以涂覆22mm的蓋玻片。對(duì)于直徑100mm的培養(yǎng)皿，每個(gè)加入約6mL;對(duì)于60mm培養(yǎng)皿添加約2.3mL，對(duì)于35mm培養(yǎng)皿添加約1mL。3）將涂有膠原蛋白的蓋玻片或帶有蓋子的培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)移到氨蒸氣室并暴露三分鐘。4）在無(wú)菌蒸餾水中（35mm培養(yǎng)皿加5mL，60mm培養(yǎng)皿加10mL等）浸泡涂布的蓋玻片或培養(yǎng)皿30min。吸取原蒸餾水并加0.5-1.0mL無(wú)菌蒸餾水，放置在層流罩中過(guò)夜。5）吸出蒸餾水，用含血清的平衡鹽緩沖液溶液代替并保存在2-8°C。

具體實(shí)施方式實(shí)施例1止血材料的制備1、選擇能與鼠尾膠原蛋白聯(lián)合發(fā)揮作用的聚乙烯醇、殼聚糖作為輔料。各個(gè)材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?.2%0.2%。余量為水。2、將混合材料用無(wú)菌水溶解后澆入培養(yǎng)小板，-40°C預(yù)凍池，再轉(zhuǎn)入_80°C超低溫冰箱急凍4h，再轉(zhuǎn)入真空冷凍干燥機(jī)中將復(fù)合材料在-4°C下冷凍干燥10h，即可以得到復(fù)合型凍干止血材料。Co60輻射滅菌，干燥保存。凍干的材料可直接用于各種傷口的止血。實(shí)施例2止血材料的制備1、選擇能與鼠尾膠原蛋白聯(lián)合發(fā)揮作用的聚乙烯醇、殼聚糖作為輔料。各個(gè)材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?%2%1%，余量為水。2、將混合材料用無(wú)菌水溶解后澆入培養(yǎng)板，-20°C預(yù)凍，再轉(zhuǎn)入_80°C超低溫冰箱急凍8h，再轉(zhuǎn)入真空冷凍干燥機(jī)中將復(fù)合材料在-4°C下冷凍干燥30h，即可以得到復(fù)合型凍干止血材料。Co60輻射滅菌，干燥保存。成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法，并且制作簡(jiǎn)便,成本低廉。

實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：探討應(yīng)用鼠尾膠原在豚鼠前庭毛細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)中的促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁效果。方法制作鼠尾膠原，觀察全細(xì)胞膜片鉗實(shí)驗(yàn)中，自制的鼠尾膠原對(duì)前庭毛細(xì)胞的貼壁黏附作用。結(jié)果無(wú)鼠尾膠原時(shí)，前庭毛細(xì)胞懸浮于外液，不宜封接；有鼠尾膠原時(shí)，前庭毛細(xì)胞貼附于培養(yǎng)皿底壁，易于封接和長(zhǎng)時(shí)間(約8h)的觀察和記錄。鼠尾膠原對(duì)前庭毛細(xì)胞具有良好的貼壁黏附促進(jìn)作用。結(jié)論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄，并且制作簡(jiǎn)便，成本低廉。制備鼠尾膠原：吸去生理鹽水，將尾腱稱重（0.5-1克）。太原鼠尾膠原廠家供應(yīng)

鼠尾膠原、多聚賴氨酸和明膠3種基質(zhì)對(duì)體外培養(yǎng)角膜上皮細(xì)胞增殖的影響。寧波正規(guī)鼠尾膠原廠家

鼠尾Ⅰ型膠原：材料與方法：1.主要材料、試劑和儀器鼠尾、鹽酸、等滲氯化鈉溶液、鈣液、磷液均購(gòu)自上海晶純生化科技股份有限公司。日立高新TEMHT770(日本日立公司)；多功能粉末X射線衍射儀。2.酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原蛋白取大鼠尾巴洗凈，用75%的乙醇浸泡5min。將尾巴剪開(kāi)，去掉皮毛，并剪成小段，抽出銀色的肌腱。將肌鍵剪斷置于平皿中，用無(wú)菌等滲氯化鈉溶液浸泡。吸去等滲氯化鈉溶液，將肌鍵置于平皿中剪碎，按每克肌鍵50mL的比例加入0.1%的醋酸溶液。搖晃，將肌鍵分散于醋酸溶液中，4℃放置一周，然后以2186×g離心20min。在醋酸溶液的酸解下，肌腱水解成膠凍狀凝膠，置于冰箱4℃保存。論鼠尾膠原能促進(jìn)毛細(xì)胞貼壁，涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長(zhǎng)時(shí)程記錄，并且制作簡(jiǎn)便，成本低廉。寧波正規(guī)鼠尾膠原廠家