原代細胞的優勢與不足細胞培養很好的補充了體內實驗的不足，它讓細胞功能和進程的研究更具可操作性。細胞系的一個缺點是它們往往與原始的組織有不一樣的遺傳和表型。相比之下，原代細胞保持了細胞在體內的許多重要標志和功能。原代細胞的生長：雖然原代細胞有諸多優點，但是獲得高純度的原代細胞是一個非常艱巨的過程。比起細胞系，原代細胞可謂是極其敏感，需要額外添加經典培養基所沒有的營養。原代細胞要在專為每種細胞定制的特殊培養液中存活和生長。例如內皮細胞與上皮細胞或神經元營養需求就大為不同。因此需要特殊培養基。傳統細胞培養基靠血清提供生長因子、脂類和其他未知成分供細胞生長。但高血清會導致原代細胞分化或助長成纖維細胞等污染。此外，使用血清還會顧慮費用增高和批次差異等問題。使用低血清或無血清的特殊成分培養基不僅可以避開這些問題，還能更好的促進原代細胞的生長。另外，將原代細胞接種在生理親和性的基板上可以顯著提高細胞貼壁率、生長狀態和純度。基因表達分析：基因表達直接影響細胞功能，基因表達分析對研究原代細胞起重要作用。傳統的報告基因檢測和cDNA芯片方法往往需要轉染或大量高質量RNA。但是原代細胞是出了名的難轉染。具有多種原代細胞，包含人源細胞、大鼠細胞、小鼠細胞。上海實驗原代細胞外包

    服務名稱：酒精性肝損傷模型構建服務服務于各大科研院校、醫院和藥企，致力于臨床轉化和產業化應用的高新技術公司。公司建立了國內規模的細胞-動物平臺，其中細胞平臺涵蓋各類正常/細胞株、耐藥株、熒光示蹤細胞、原代細胞、基因敲除細胞等近千種，并且提供豐富的細胞功能學檢測服務：血管生成實驗、Transwell侵襲力檢測、劃痕遷移實驗、克隆形成實驗、STR檢測等。同時公司的SPF級動物實驗平臺，提供從普通大小鼠到免疫缺陷鼠（裸鼠、NOD/SCID、NSG）飼養與建模服務：PDX模型、HBV乙肝模型、PD帕金斯癥模型、糖尿病模型等。以基礎科研平臺和技術研發為依托，公司持續的推動臨床應用的產業化，分別建立了個體化研究中心和新一代藥效篩選服務平臺，借助這兩個產業化平臺，公司將更快更好的將新技術向臨床轉化落地，讓科研成果更多的服務社會大眾，推動生命健康領域的發展。截止目前公司已與300多家高校、醫院、藥企等建立了良好的合作關系，客戶遍及港、澳及全國各地。未來公司也將一如既往地，以更好的產品、更高的質量、更優的服務回饋每一個客戶。誠為基質為本協為贏，恒渡生物期待與您的合作！云南疾病模型原代細胞實驗室采用CD29、CD90、CD34、CD45抗體進行流式細胞鑒定，結果顯示：CD29、CD90呈現陽性;CD34、CD45呈現陰性。

    7)蓋好培養瓶的蓋子，輕輕搖晃培養瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開蓋子。(8)將培養瓶放入培養箱中（37℃，5%CO2，95%空氣）(9)放入培養箱后第6-16小時更換一次培養基，以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。5、細胞培養過程中，多久更換一次培養基？這取決于細胞生長的速度。一般而言2-3天更換一次培養基，許多細胞培養實驗室通常在周一，周三，周五更換培養基。注意：凍存細胞復蘇后，在6-16小時內更換培養基，以去除殘留的二甲基亞楓和死亡的細胞。6、我能擴增培養和再次凍存原代正常人類細胞嗎？這取決于細胞的類型。一些細胞類型像神經細胞，神經膠質細胞和一些生長緩慢的上皮細胞，不推薦擴增培養和再次凍存。其它的細胞類型像成纖維細胞、星形細胞、腎系膜細胞、星形膠質細胞等等，可以擴增培養和再次凍存。然而，需要注意的是再次凍存的過程可能導致細胞生長性能的改變。7、培養瓶中應該加入多少體積的培養基？我們推薦的用量為：T-25培養瓶5ml，T-75培養瓶15ml，T-150培養瓶30ml。

    ⑦實驗完畢及時收拾，保持工作區域清潔整齊，用75%酒精清潔臺面。（3）細胞污染的預防①實驗用品防止污染。細胞培養所用試劑、耗材、器材的清洗、消毒要徹底，各種溶液滅菌要仔細，并在無菌實驗檢測陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔、消毒、滅菌。②操作過程防止污染。③穿著容易起靜電或吸附灰塵的衣物必須更換為白大褂后才能進入細胞間。④實驗開始前需要確定戴的手套沒有問題，只要接觸過生物安全柜之外的物品，必須及時對手套進行消毒。⑤進入細胞培養間后關好門，坐下來盡量少走動以免影響生物安全柜的風簾。工作開始前要先用75%酒精棉球擦手和瓶蓋。事先要嚴格檢查所用的器材、溶液和細胞，不要把污染品或未經消毒的物品帶入無菌室內，更不能隨便使用，以免造成大規模污染。⑥細胞操作時動作要輕，必須在火焰周圍無菌區內打開瓶口，并將瓶口放在火焰周圍簡單轉動燒灼，注意不要讓火焰把塑料瓶口燒化。⑦實驗操作時生物安全柜的隔板要盡可能放低，盡量減少談話，打噴嚏或咳嗽時不能對著工作區，以免造成不必要的污染。⑧瓶蓋應當倒放在遠離自己的地方，以避免瓶蓋被誤操作所污染。⑨不要從敞開的容器口上方經過。骨骼肌的一般形態特征肌細胞呈纖維狀，不分支，有明顯橫紋，核很多，且都位于細胞膜下方。

    如果接種的細胞密度過低，細胞之間的促生長作用很小，也很難使細胞適應從體內的組織環境到被分散后進入生存環境的變化過程。如果接種的細胞密度過大，會導致營養物質供應不足，代謝廢物積累較快需要經常換液和傳代。2）適當增大原代培養接種的細胞密度，給培養的細胞提供更多的類似于在體內時細胞之間的相互作用，會極大提高原代培養的細胞在體外存活率。待細胞適應體外環境后進行傳代培養時再以較低的密度接種和培養。3）盡快使接種的細胞貼壁，是決定培養能否成功的關鍵。可以在接種后先將培養瓶置培養箱內培養3h到5h，待細胞貼壁后，再補足培養液繼續培養。3、懸浮型原代細胞1）必須保持細胞的懸浮狀態。可以通過增加培養液的黏度來幫助細胞呈懸浮狀態，如給培養液中加入低濃度的透明質酸復合物。在有攪拌裝置的培養器皿內加入培養液是，以5ml為限度，否則攪拌時會產生氣泡對細胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過快，否則即可使培養液溢出又容易造成污染。如果培養液的量在5ml以下，可以采用旋轉瓶培養。給懸浮培養的細胞換液時要注意不要吸出細胞。2）能夠進行懸浮培養的細胞，其生命力一般都比較旺盛，體外分裂增殖的速度較快，營養成分消耗大。臍靜脈平滑肌細胞原代分離培養3天后，可見細胞貼壁伸展。上海實驗原代細胞外包

血管疾病發生和發展的一個主要因素是由于血管平滑肌細胞轉變成為了具有繁殖能力的表型。上海實驗原代細胞外包

    易操作原代細胞和細胞系的比較3.原代細胞的應用由于原代細胞生物學特性未發生很大改變，接近和反映體內生長特性，因此是：(1)研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的工具；(2)更好實現醫診治模式，實現個體化用藥的目的。第二部分：原代細胞分離和培養技術原代培養的原理將動物機體的各種組織從機體中取出，經各種酶(常用胰蛋白酶/膠原酶)、螯合劑(常用EDTA)或機械方法處理，分散成單細胞，置合適的培養基中培養，使細胞得以生存、生長和繁殖，這一過程稱原代培養。主要包括取材——分離——培養等3部分；在原代細胞應用較多的包括：組織（如實體瘤、皮膚等）、懸浮細胞的取材等。下面依次介紹：一、組織的取材病人自體的原代細胞由于更接近臨床患者標本，可以更好實現醫療的診治模式，實現個體化用藥的目的。所以對病人自體細胞體外分離與培養十分必要。基本過程如下圖所示：原代細胞的分離步驟備注：上圖細胞為肉瘤患者的原代細胞具體步驟如下：1.在無菌條件下的冰上對新鮮離體的組織，剔除包膜及壞死組織，無菌PBS清洗3-5次；切成約1mm3組織塊；2.加入2mmol的EDTA，搖勻后放置冰上約30-60min；3.離心，并加入膠原酶消化（含蛋白酶）；4.消化期間，置于37°培養箱。上海實驗原代細胞外包