然后5％的nds。含有％triton)封閉通透2h，孵育一抗，4℃過夜。第二天，pbs清洗三次后，孵育相應的熒光二抗，然后再用pbs清洗三次，封片，觀察。結果見圖8，在小鼠4月齡時，通過視網膜冰凍組織切片染色外節抗體rhodopsin以及內節抗體nak-atpase后發現，相較于野生型小鼠，gm20541基因敲除純合子小鼠(圖中sixko)視網膜外節明顯縮短，表現出了明顯退化表征。綜上，可以看出，本發明實施例以小鼠為例，通過cre-loxp基因敲除技術，在小鼠視網膜前體細胞中特異性敲除gm20541基因，小鼠表現出了視力受損，視細胞外節變短退化以及視細胞丟失等視網膜色素變性疾病典型表征。由此充分說明，在視網膜前體細胞敲除gm20541基因，可以使目標動物表現出視網膜色素變性疾病。視網膜前體細胞敲除gm20541基因的動物，可以作為視網膜色素變性疾病模型。該疾病模型可以用于視網膜色素變性疾病研究等領域中，為該疾病的研究例如發病過程、機制以及相關藥物的篩選提供一種新的模型。雖然本發明實施例展示了在小鼠的視網膜前體細胞敲除gm20541基因后的表型，但本領域技術人員容易理解到，小鼠作為哺乳動物的代表性動物，在其他的哺乳類動物中敲除gm20541基因或其同源基因也應當具有相似的表型。可以嚴格控制實驗條件，增強實驗材料的可比性。C57動物模型構建

    特發性肺纖維化（IPF）小鼠模型建立【方法】1、BALB/c小鼠麻醉，6-8周齡，體重20~25g，仰臥固定于實驗臺上，頸部去毛后酒精消毒，切開皮膚，逐層暴露氣管；2、將1mL注射器經兩氣管軟骨環間隙朝向心端刺入氣管，回抽無阻力；3、注入博萊霉素（約4~5mg/kg）再向氣管內注入～3次，使藥物在肺部分布均勻；4、以大鼠身體長軸為中心，正反快速旋轉鼠板1～2分鐘。縫合皮膚，局部聚維酮碘消毒(或用青霉素消毒)防止，室溫保持在24～25℃，待動物自然清醒后置籠內常規飼養。肺纖維化模型發展時間：2周可見肺系數(肺重/體重×100％)、羥脯氨酸含量明顯升高。顯微鏡下可見炎癥細胞浸潤，以淋巴細胞、單核吞噬細胞為主，并有肺泡壁增厚、成纖維細胞增生等Ⅱ級肺泡炎表現。4周可見肺間質內有大量散在綠染的膠原纖維，肺泡結構破壞，見有許多纖維細胞等Ⅲ級肺間質纖維化病變。大鼠模型病理組織學與病理生理學改變與人類肺間質纖維化相似。其病變早期表現為滲出性肺泡炎，炎癥細胞在病變處聚集增多。晚期為肺間質纖維化，間質細胞增生，基質膠原聚集取代正常的肺組織結構。【檢測】組織病理切片HE染色。北京外包動物模型造模放血致失血性貧血小鼠模型。

    微波爐中融化后制成1％的瓊脂糖膠。取10μlpcr產物于加樣孔中，120v恒壓瓊脂糖電泳15min.用凝膠成像系統成像。圖4中a上方是gm20541條件性敲除鑒定結果，wt表示野生型對照，條帶大小為223bp；het表示雜合子，有兩個條帶223bp和358bp；sixko表示純合子，條帶大小為358bp。圖4中a下方是six3－cre鑒定結果。six3－cre大小為200bp。根據圖4中a的結果，顯示所采用的鑒定方法可對新生小鼠的基因型進行有效鑒定。其中，gm20541基因敲除純合子小鼠即可作為視網膜色素變性疾病模型(后文用sixko或cko表示gm20541基因敲除純合子小鼠；ctr是指野生型；het是指雜合子)，并進行相關表型的驗證。(5)rt-pcr實驗分析six3-cre敲除小鼠視網膜中基因敲除效率驗證，方法如下：(a)分別分離野生型和突變型小鼠視網膜組織，置于，加入1mltrizol提取液，室溫20分鐘；(b)加入200μl氯仿，充分混勻，室溫靜置10分鐘；(c)將樣品置于4度離心機，10000轉離心15分鐘；(d)小心吸取上清液，加入等體積異丙醇，充分混勻，10000轉離心沉淀rna；(e)75％乙醇清洗析出的總rna，離心再次沉淀，然后晾干加入depc水溶解；(f)提取的總rna用cdna合成試劑盒(invitrogen,waltham,ma,usa)合成cdna。

    首先，預實驗必須要當做正式實驗來對待（態度要放端正，這是必須的）。預實驗的每一步都需要詳細規劃，多方籌謀。不論是實驗動物的選擇，還是檢測試劑的購買，都盡量和正式實驗統一標準。建議大家先把所有試劑和藥物購買完畢后，再去購買實驗動物。因為動物會長胖，長胖后給藥劑量就要增加，不僅多花錢，并且還容易影響實驗效果。筆者曾經提前將實驗動物買回，但因為特殊原因沒能購買到造模藥物，終只能忍痛割愛將動物贈送他人，白白虧了一筆血汗錢（那批老鼠在我這兒白吃白喝長得太胖，沒辦法用作造模）。動物及試劑購買首先需要考慮：實驗動物品種、體重、性別、周齡（通常根據既往文獻報道可以獲得答案）、數量（需要考慮到實驗有一定動物死亡率或者動物本身會打架互毆，因此需要提前購買足夠的動物）。動物購買的途徑、安置的地點，飲食管理（一般實驗室會有動物房，也可以從其他地方購買），動物免疫證明、倫理證明需要提前準備好。實驗相關的試劑和藥物：比如造模藥物和器械，動物干預所需藥物，陽物選擇及購買（有些藥物購買很困難，必須通過特殊程序才能買到）。如果涉及到有創操作，要提前準備好物（建議提前購買），手術器械。需要了解自身實驗平臺能完成哪些技術。好的動物模型能夠較好地模擬疾病狀態，為的研究提供可能。

    中風模型）股動脈內皮損傷模型頸動脈結扎或部分結扎術深靜脈血栓模型下肢缺血模型門腔靜脈分流術左、右心血流動力學測試左心系統測壓右心系統測壓腹部手術膽管結扎術胃大部切除術小腸部分切除術急性腎衰模型單側腎切除術3/4腎切除術5/6腎切除術脾切除術腎上腺切除術腎上腺髓質摘除術骨關節炎模型脾神經切除術肝臟迷走神經切斷術胃迷走神經切斷術膈下迷走神經切斷術去勢術輸精管結扎術卵巢切除術單側或雙側輸卵管結扎術子宮切除術輸尿管結扎術神經系統手術單側腦內定位插管雙側腦內定位插管側腦室導管側腦室微量滲透泵導管第3腦室插管腓腸肌神經切除術軟組織手術甲狀腺切除術甲狀旁腺切除術甲狀腺切除術伴甲狀旁腺再植入術胸腺切除術松果體切除術垂體切除術傳感器植入手術血壓遙測左心室壓遙測門靜脈壓遙測血壓與心電圖遙測血壓與腦電圖遙測胸內壓遙測胸內壓與心電圖遙測心電圖遙測腦電圖遙測肌電遙測心電圖與腦電圖遙測腦電圖與肌電遙測血糖遙測體溫與活動度遙測血管導管手術頸動脈導管顱內給藥頸動脈導管腹主動脈導管股動脈導管股靜脈導管單側頸靜脈導管雙側頸靜脈導管門靜脈導管下腔靜脈導管非血管導管手術膽管導管胃導管十二指腸導管空腸導管回腸導管盲腸導管結腸導管膀。小鼠膽管結扎誘導炎癥性肝損傷和肝纖維化模型的建立。C57動物模型構建

面神經受損而致面部表情肌群的運動功能障礙,對患者的心理和日常生活造成很大的影響。C57動物模型構建

    所用儀器為bio-rad的化學發光凝膠成像系統。結果見圖1中c和d，可以看出，通過免疫印跡(westernblot)的方法證明了gm20541蛋白在小鼠腦、肝臟、視網膜、心臟、腎臟以及脾中均有表達。實施例2本實施例以小鼠為目標動物，對本發明提供的視網膜色素變性疾病模型的構建方法進行說明，gm20541基因敲除的路線如圖2所示，具體操作如下：基因敲除小鼠獲取步驟：1將與小鼠gm20541基因同源的5’臂、含有報告基因gfp的表達框、有neo抗性基因的表達框、兩端有同向排列loxp位點的第3外顯子和3’端臂克隆到bac載體(圖2)以用于替換欲敲除的gm20541基因第3個外顯子；2利用dna同源重組技術將gm20541基因中的第3個外顯子替換，得到gm20541基因條件性敲除的小鼠胚胎干細胞；3利用步驟2得到的胚胎干細胞制備得到含gm20541基因敲除細胞的嵌合體小鼠(圖2)；4將步驟3得到的嵌合體小鼠和野生型小鼠交配繁育，在后代中篩選出gm20541基因敲除的雜合子小鼠(圖2)。鑒定：實施例2中長距離pcr鑒定陽性子一代鼠的實驗結果，擴增5’端長臂使用引物對gm5’lrf和sa3’r，擴增產物為。gm5’lrf:5’-ggcaggatcttcacctgttgaccaacatgcct-3’；sa3’r:5’-ccaaccccttcctcctacatagttggcagt-3’。結果見圖3中a。C57動物模型構建