外泌體作為藥物載體由于特殊的結(jié)構(gòu)和循環(huán)方式，外泌體作為藥物運輸?shù)妮d體具有獨特的優(yōu)勢。例如外泌體的尺寸分布能夠增強滲透滯留效應(yīng)，從而有選擇性地深入組織;其外層磷脂雙分子層可以保護內(nèi)容物不受各種生物酶的影響，維持各種生物分子的活性;外泌體普遍存在于各種體液和組織中，其體積小，結(jié)構(gòu)、組成與細(xì)胞膜類似，導(dǎo)致外泌體可以在避開免疫系統(tǒng)監(jiān)督的同時深入組織內(nèi)部，有較好的生物相容性;當(dāng)采用內(nèi)源外泌體時，能明顯降低其他藥物載體可能引起的有害免疫反應(yīng);除此之外，某些細(xì)胞來源或經(jīng)特殊修飾過的外泌體具有良好的特異性，可以與特定的或組織結(jié)合。因此，載藥成為外泌體研究的一個重要分支，具有良好的應(yīng)用前景。在外泌體中引入藥物的方式包括體內(nèi)裝載和體外裝載兩種。體內(nèi)藥物裝載可以通過傳統(tǒng)方法(如病毒轉(zhuǎn)染、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染或電穿孔等)轉(zhuǎn)染來源細(xì)胞，編碼感興趣的RNA或蛋白質(zhì)，也可以使藥物與來源細(xì)胞共混，使細(xì)胞分泌產(chǎn)生含有目標(biāo)生物分子的外泌體。體外藥物裝載則首先需要得到純化的外泌體，然后將感興趣的藥物通過電穿孔或脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染等方法裝入純化的外泌體。外泌體內(nèi)可裝載的藥物包括小分子化學(xué)藥物、蛋白質(zhì)和多肽、核酸藥物、天然產(chǎn)物等。EdU細(xì)胞增殖檢測是一種新型的細(xì)胞增殖檢測方法。浙江裸鼠科研技術(shù)服務(wù)分離

    m6A研究又有新手段了？趕緊來了解一下吧！欄目：研究動態(tài)發(fā)布時間：2019-08-14RNA甲基化m6A是如今的研究熱點之一,Cell上新發(fā)表了一篇介紹不使用m6A抗體的檢測mRNAm6A水平的Resource文章......RNA甲基化m6A是如今的研究熱點之一，目前主要的研究思路包括差異表達(dá)的write，reader和eraser基因分析；m6A抗體檢測全轉(zhuǎn)錄組甲基化水平；分析m6A甲基化水平變化的靶基因和下游機制研究。而在7月25日的Cell上新發(fā)表了一篇介紹不使用m6A抗體的檢測mRNAm6A水平的Resource文章，小編時間和大家分享一下。作者開發(fā)這一方法的前提是有研究報道了MazF能特異性的識別無修飾的ACA序列并發(fā)揮RNA酶活性在ACA之前剪切底物。但ACA序列的個A發(fā)生m6A甲基化之后將無法被MazF所識別，如圖一所示。圖1MazFRNA酶作用示意圖根據(jù)這一原理，作者將純化后的mRNA進行MazF酶處理，然后再對打斷的RNA進行逆轉(zhuǎn)建庫測序。對于無修飾的位點，ACA處被完全剪切，測序reads正好分布于該位點上下游而且比對至該處的上下游reads數(shù)是相同的.如圖2所示。而甲基化位點的reads會包含上下游的序列。作者開發(fā)了MAZTER-MINE軟件包專門進行分析（圖3）。湖南大鼠科研技術(shù)服務(wù)購買干貨分享 | PCR反應(yīng)污染原因追蹤及污染處理方法。

    用途基因功能研究、免/殺傷/增殖等、抗體活性篩選（細(xì)胞水平的結(jié)合和阻斷）、CAR分子的殺傷活性評價。材料與儀器（以慢pMSCV載體為例）包含目的基因和eGFP-Tag的pMSCV質(zhì)粒、帶有eGFP-Tag的pMSCV空載質(zhì)粒、GAG質(zhì)粒、VSV質(zhì)粒、Puromycin、Polybrene、Lipo3000、HEK293T細(xì)胞、opti-MEM、DMEM、FBS、雙抗、μm的濾膜、熒光顯微鏡等。步驟1、基因的構(gòu)建1)根據(jù)目的基因mRNA編碼區(qū)設(shè)計引物，分別在引物兩端加入酶切位點EcoRI和BglII。2)從細(xì)胞中提取目的基因mRNA，然后逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，然后從cDNA里面用引物把目的基因的CDS區(qū)擴增出來。PCR擴增出帶有酶切位點的目的基因編碼區(qū)序列，連接至pMD19-T載體后轉(zhuǎn)化至感受態(tài)DH5α，分別進行菌落PCR鑒定和酶切鑒定。3)使用EcoRI和BglII雙酶切下目的基因序列，電泳割膠回收純化，連接到pMSCV-eGFP載體。再次轉(zhuǎn)化到感受態(tài)DH5α，菌落PCR鑒定和酶切鑒定成功后，送至公司測序、鑒定。4)鑒定成功后，將質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至感受態(tài)DH5α中，并進行無內(nèi)質(zhì)粒抽提。GAG質(zhì)粒和VSV質(zhì)粒同樣可以轉(zhuǎn)化至感受態(tài)DH5α中，并進行無內(nèi)質(zhì)粒抽提。質(zhì)粒抽提后冷凍于-20℃保存。2、慢包裝1)使用DMEM完全培養(yǎng)基培養(yǎng)6cm皿HEK293T至匯合度為70~80%。

    轉(zhuǎn)錄組和m6A分析顯示精子發(fā)生相關(guān)基因的表達(dá)和選擇性剪接發(fā)生了改變[19]。YTHDC2可促進靶基因的翻譯效率，并降低其mRNA的豐度，在精子發(fā)生過程中起關(guān)鍵作用。當(dāng)減數(shù)分裂開始時YTHDC2表達(dá)上調(diào)，YTHDC2敲除小鼠的生殖細(xì)胞沒有經(jīng)過偶線期的發(fā)育導(dǎo)致小鼠不育[20]。在DNA損傷反應(yīng)中，METTL3可促進DNA聚合酶κ（Polκ）與核酸剪切修復(fù)途徑快速定位到UV引起的DNA損傷位點，當(dāng)缺失METTL3時，細(xì)胞無法迅速修復(fù)UV照射引起的突變，并且對UV照射更加敏感[25]。在淋巴細(xì)胞性小鼠過繼轉(zhuǎn)移模型中，Mettl3缺陷通過影響mRNAm6A修飾，降低SOCS家族mRNA衰減，增加mRNA和蛋白表達(dá)水平，從而抑制IL-7介導(dǎo)的STAT5活性和T細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)增殖和分化，進而抑制腸炎的發(fā)生[21]。在肝中，METTL14通過調(diào)控pri-miRNA的m6A修飾，影響MiR-126的生成加工，從而抑制肝的轉(zhuǎn)移[22]。在乳腺細(xì)胞中，低氧刺激能促進依賴低氧誘導(dǎo)因子HIF的ALKBH5的表達(dá)，而ALKBH5過表達(dá)降低了NANOGmRNA的m6A修飾，從而穩(wěn)定mRNA提高NANOG的表達(dá)水平，終增加乳腺干細(xì)胞所占的比例[23]。此外，低氧誘導(dǎo)乳腺細(xì)胞中依賴ZNF217的NANOG和KLF4的mRNAm6A甲基化抑制，且ALKBH5敲除降低免疫缺陷小鼠乳腺的肺轉(zhuǎn)移[24]。在肺中。建立疾病模型的目的是為了防治人類疾病。

    科手術(shù)設(shè)備|細(xì)胞/組織支持系統(tǒng)|膜片鉗|輔助設(shè)備|其它常用耗材燒杯|漏斗|量筒|廣口罐|研缽和研杵|手套|移液管|移液器(Pipette)單道手動移液器|單道電動移液器|多道手動移液器多道電動移液器|正置換移液器|瓶口分液器吸頭(Tips)濾芯吸頭(滅菌)|濾芯吸頭(未滅菌)|普通吸頭(滅菌)普通吸頭(未滅菌)|多道移液器吸頭液體工作站吸頭|其它瓶(Bottle)離心瓶|稱量瓶|存儲瓶|比重瓶|血清瓶|滴瓶吸氣瓶|細(xì)胞培養(yǎng)瓶|培養(yǎng)基瓶|其它瓶(Flask)藍(lán)蓋瓶|燒瓶|平底燒瓶|克氏(長頸)燒瓶|碘測定燒瓶|蒸餾燒瓶|容量瓶|過濾瓶|其它管(Tube&Vial)離心管|微離心管|樣品儲存管|凍存管|反應(yīng)管聚乙烯保存管|細(xì)胞培養(yǎng)管|自動上樣管|其它PCR耗材PCR管|PCR條板|PCR板|實時定量PCR毛細(xì)管其它微孔板微孔板(96孔)|微孔板(384孔)|微孔板。隨著跨學(xué)科研究的深入開展，動物疾病模型將在未來發(fā)揮更為普遍的作用，成為生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)等領(lǐng)域研究工具。寧夏豚鼠科研技術(shù)服務(wù)服務(wù)

細(xì)胞核是細(xì)胞的控制中心，它包含了遺傳物質(zhì)DNA，控制著細(xì)胞的生長和分裂。浙江裸鼠科研技術(shù)服務(wù)分離

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