建立疾病模型的目的是為了防治人類疾病。因此，疾病模型研究結果的可靠程度取決于模型與人類疾病的相似或可比擬的程度。接下來就讓上海研錄帶您了解相關知識。一個好的疾病模型應具有以下特點：①能夠再現(xiàn)所要研究的人類疾病，動物疾病表現(xiàn)應該與人類疾病相似；②動物能重復產(chǎn)生該疾病，盡可能能在兩種動物體內復制該病；③動物背景資料完整，實驗動物合格，生命周期要滿足實驗需要;④動物要價廉、來源充足、便于運送；⑤盡可能選用小動物。生物醫(yī)學科研專業(yè)設計中常要考慮如何建立動物模型的問題，因為很多闡明疾病及療效機制的實驗不可能或不應該在患者身上進行。常要依賴于復制動物模型，但一定要進行周密設計，設計時要遵循下列一些原則：(一)相似性在動物身上復制人類疾病模型，目的在于從中找出可以推演應用于患者的有關規(guī)律。外推法(extrapolation)要冒風險，因為動物與人到底不是一種生物。如，在動物身上無效的藥物不等于臨床無效，反之亦然。因此，設計動物疾病模型的一個重要原則是，所復制的模型應盡可能近似于人類疾病的情況。能夠找到與人類疾病相同的動物自發(fā)性疾病當然是比較好的。(二)重復性理想的動物模型應該是可重復的，甚至是可以標準化的。如。裸鼠皮下成瘤模型造模意義.上海實驗科研技術服務服務

    RNA甲基化修飾（m6A）研究RNA甲基化修飾約占所有RNA修飾的60%以上，而N6-甲基腺嘌呤（N6-methyladenosine,m6A）是高等生物mRNA和lncRNAs上為普遍的修飾。目前發(fā)現(xiàn)microRNA，circRNA,rRNA,tRNA和snoRNA上都有發(fā)生m6A修飾。m6A修飾主要發(fā)生在RRACH序列中的腺嘌呤上，其功能由“編碼器(Writer)”、“消碼器(Eraser)”和“讀碼器(Reader)”決定[1]。“編碼器(Writer)”即甲基轉移酶，目前已知這個復合物的成分有METTL3，METTL14,WTAP和KIAA1429；而ALKBH5和FTO作為去甲基酶（消碼器）可逆轉甲基化；m6A由m6A結合蛋白識別，目前發(fā)現(xiàn)m6A結合蛋白（讀碼器）有YTH結構域蛋白（包括YTHDF1,YTHDF2,YTHDF3，YTHDC1和YTHDC2）和核不均一蛋白HNRNP家族（HNRNPA2B1和HNRNPC）。m6A酶系統(tǒng)METTL3是早先被鑒定為結合SAM的組件，其缺失引起小鼠胚胎干細胞、Hela細胞和HepG2細胞中m6Apeaks的減少。METTL3及其同源蛋白METTL14定位在富含剪切因子的細胞核內亞細胞器－核小斑（Nuclearspeckle）上，顯示ｍ６Ａ修飾可能和ＲＮＡ的剪切加工相關。WTAP與METTL3–METTL14二聚體相互作用，并共定位于核小斑，影響甲基化效率，參與mRNA剪。而KIAA1429作為候選的甲基轉移酶復合體的新亞基。浙江小鼠科研技術服務實驗可以普遍應用于生物醫(yī)學研究、藥物篩選、腫、瘤診斷等領域。

    常見的有理染色、WesternBlot、PCR等），實驗儀器是否需要預約使用。如果需要外送公司檢測，需要提前聯(lián)系好商家，以及了解清楚樣本如何獲取，如何運輸。飼養(yǎng)動物及干預動物購買后需要將時間節(jié)點提前規(guī)劃好，比如，周需要做什么？測量體重？觀察飲食？測量需要的指標？中間有無特殊操作？比如灌胃、測量體重、做CT檢測、取血？……第幾周取材？取材需要哪些？預實驗方案就要提前設計清楚以上內容。取材及樣品準備取材需要提前到動物房禁食、稱體重、取出動物、手術的、固定所需要的試劑和EP管，WesternBlot和PCR所需要的樣本儲存條件。比如凍存管、EP管，是否需要冰塊？是否需要液氮？取材當天需要多少人？是否需要請人幫忙？如果所需要取出的樣本較多，建議大家請人一起幫忙，流水線作業(yè)，這樣能節(jié)省時間，并且能保證樣品的質量。如果請人，每個人需要負責哪一板塊的工作，比如誰負責，誰負責取血液，誰負責取，誰負責拍照、誰負責儲存，都需要提前規(guī)劃交代清楚。實驗指標檢測如果是需要自己做的檢測，比如常見的WesternBlot、PCR，建議提前可以看看教程（無論是視頻還是貼吧，都要自己多方參考）。有了一定的理論基礎后，再向老師、師兄師姐學習經(jīng)驗和技術。

    制作該模型的方法為大鼠腹腔麻醉消毒后選取腹部正中切口打開腹腔長約2cm，尋找盲腸，小心分離其遠端與大腸的系膜，在盲腸遠端1/2處用無菌4號絲線緊緊結扎，并用無菌7號針頭在已結扎盲腸遠端處貫通穿刺，然后把盲腸推回腹腔，關閉腹腔。影響因素多數(shù)研究一致認為盲腸結扎位置是CLP模型中死亡率和疾病嚴重程度的主要決定因素。結論為：①結扎25%或以下的盲腸死亡率幾乎為零，為輕度膿毒癥；②結扎50%～60%的盲腸導致術后死亡率為60%，為中度膿毒癥；③結扎75%或以上的盲腸導致小鼠在術后2～3d內全部死亡，為重度膿毒癥。而在不同程度膿毒癥中，死亡主要集中在初的48h內。有研究通過改變盲腸結扎位置和穿刺針直徑來調節(jié)膿毒癥的嚴重程度，其中提到與結扎長度小于1cm的小鼠相比，結扎長度超過1cm的小鼠死亡率增加至100%；增加穿刺針的直徑也使得存活率從100%（22G針）降低至55%（19G針）。結論為：在上述兩個因素中，盲腸結扎位置比針頭大小影響更為。CLP誘導的膿毒癥術后6h即可出現(xiàn)菌血癥，術后約12h出現(xiàn)膿毒癥相關臨床癥狀，包括發(fā)熱、寒戰(zhàn)、毛發(fā)豎立、全身無力和活動減少等，術后18h開始死亡。總之，在制作CLP模型時。protocol 分享｜過表達細胞株的構建。

    用途基因功能研究、免/殺傷/增殖等、抗體活性篩選（細胞水平的結合和阻斷）、CAR分子的殺傷活性評價。材料與儀器（以慢pMSCV載體為例）包含目的基因和eGFP-Tag的pMSCV質粒、帶有eGFP-Tag的pMSCV空載質粒、GAG質粒、VSV質粒、Puromycin、Polybrene、Lipo3000、HEK293T細胞、opti-MEM、DMEM、FBS、雙抗、μm的濾膜、熒光顯微鏡等。步驟1、基因的構建1)根據(jù)目的基因mRNA編碼區(qū)設計引物，分別在引物兩端加入酶切位點EcoRI和BglII。2)從細胞中提取目的基因mRNA，然后逆轉錄成cDNA，然后從cDNA里面用引物把目的基因的CDS區(qū)擴增出來。PCR擴增出帶有酶切位點的目的基因編碼區(qū)序列，連接至pMD19-T載體后轉化至感受態(tài)DH5α，分別進行菌落PCR鑒定和酶切鑒定。3)使用EcoRI和BglII雙酶切下目的基因序列，電泳割膠回收純化，連接到pMSCV-eGFP載體。再次轉化到感受態(tài)DH5α，菌落PCR鑒定和酶切鑒定成功后，送至公司測序、鑒定。4)鑒定成功后，將質粒轉化至感受態(tài)DH5α中，并進行無內質粒抽提。GAG質粒和VSV質粒同樣可以轉化至感受態(tài)DH5α中，并進行無內質粒抽提。質粒抽提后冷凍于-20℃保存。2、慢包裝1)使用DMEM完全培養(yǎng)基培養(yǎng)6cm皿HEK293T至匯合度為70~80%。盡管存在挑戰(zhàn)，動物疾病模型的發(fā)展前景仍然值得期待。海南疾病科研技術服務實驗

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    m6A研究又有新手段了？趕緊來了解一下吧！欄目：研究動態(tài)發(fā)布時間：2019-08-14RNA甲基化m6A是如今的研究熱點之一,Cell上新發(fā)表了一篇介紹不使用m6A抗體的檢測mRNAm6A水平的Resource文章......RNA甲基化m6A是如今的研究熱點之一，目前主要的研究思路包括差異表達的write，reader和eraser基因分析；m6A抗體檢測全轉錄組甲基化水平；分析m6A甲基化水平變化的靶基因和下游機制研究。而在7月25日的Cell上新發(fā)表了一篇介紹不使用m6A抗體的檢測mRNAm6A水平的Resource文章，小編時間和大家分享一下。作者開發(fā)這一方法的前提是有研究報道了MazF能特異性的識別無修飾的ACA序列并發(fā)揮RNA酶活性在ACA之前剪切底物。但ACA序列的個A發(fā)生m6A甲基化之后將無法被MazF所識別，如圖一所示。圖1MazFRNA酶作用示意圖根據(jù)這一原理，作者將純化后的mRNA進行MazF酶處理，然后再對打斷的RNA進行逆轉建庫測序。對于無修飾的位點，ACA處被完全剪切，測序reads正好分布于該位點上下游而且比對至該處的上下游reads數(shù)是相同的.如圖2所示。而甲基化位點的reads會包含上下游的序列。作者開發(fā)了MAZTER-MINE軟件包專門進行分析（圖3）。上海實驗科研技術服務服務