轉錄組測序結果及TCGA數據庫分析）圖5RNA-Seq和m6A-seq聯合鑒定SOCS2是介導的m6A修飾的下游靶基因PLoSOne2015,在許多不同種類的RNA中，都已觀察到N6-腺苷(m6A)的甲基化，但其在microRNAs中還沒有被研究。研究者在FTO1C1,FTO2D4和FTO3C3細胞系中，通過敲除m6A甲基轉移酶FTO篩選到表達差異的microRNA,說明miRNA受m6A甲基化的調控。進一步通過MeRIP-Seq發現相當一部分的microRNA具有m6A修飾。通過motif分析，他們發現了區分甲基化和非甲基化microRNA的一致序列。該文章所述的表觀遺傳修飾在基因表達的轉錄調控的復雜性上增加了一個新的層次。圖FTO敲除對甲基化的miRNAs的穩定狀態的影響。參考文獻Y,DominissiniD,RechaviG,HeC:Geneexpressionregulationmediatedthroughreversiblem(6)(5):'(1):(12):(6):(1):(1):(uridine)(41):(6)(7540):(1):(7481):(4):(6)A-LAIC-seqrevealsthecensusandcomplexityofthem(6)(8):'UTRm(6)(4):(7544):(6)(6):(5):(7667):(2):"">panstyle="color:#f5c81c;">xiainducesthebreastcancerstemcellphenotypebyHIF-dependentandALKBH5-mediatedm(6)(14):"">panstyle="color:#f5c81c;">(40):(6)(3):(1):(1):(4):(11):。科研中我們涉及到的免疫沉淀實驗通常指：免疫共沉淀（Co-IP）、RIP、Chip等等，將幾種實驗簡單概述一下。湖北組織科研技術服務技術

    原理HE染色主要使用蘇木精和伊紅這兩種染液，其中蘇木精堿性染液為藍色，可以將組織的酸性結構染成藍紫色（細胞核呈現藍色；軟骨基質、鈣鹽顆粒呈深藍；粘液呈灰藍）；伊紅是一種化學合成的酸性染料，在水中解離成帶負電荷的陰離子，易于蛋白質氨基中的正電荷結合使細胞漿染色。細胞漿、肌肉、結締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色。材料與儀器小鼠、固定液、酒精、二甲苯、石蠟、蜂蠟蘇木精染液、伊紅酒精溶液、鹽酸酒精溶液甘油蛋白粘片劑、中性樹膠石蠟包埋機、切片機、恒溫箱、蠟杯酒精燈、解剖剪、培養皿、鑷子、單面刀片染色缸、蓋玻片、載玻片、玻片盤、顯微鏡溫度計、水浴鍋步驟一、制作卵巢石蠟切片1、取材小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉（50mg/kg）進行麻醉，頸椎脫臼法處死小鼠，取出雙側卵巢。取下所需組織，切成一小塊3~4mm厚。2、固定、洗滌、脫水（1）將切好的卵巢組織用生理鹽水洗一下，使用中性福爾馬林固定液固定30~50min。后用流水沖洗3次，每次5min。（2）卵巢組織依次經70%、80%、90%乙醇溶液脫水，各30min。（3）再放入95%、100%乙醇溶液各2次，每次20min。3、透明、透蠟（1）使用純酒精、二甲苯等量混合液處理組織15min。湖北哪里有科研技術服務服務實驗干貨 | 常用分子生物學技術原理.

    采用opti-MEM和Lipo3000分別轉染含有目的基因的pMSCV-eGFP、VSV、GAG質粒及對照載體，每皿加入脂質體-質粒轉染混懸液按購買脂質體相關說明書操作定量。繼續培養24h。2)24小時后，將培養基更換為新鮮的DMEM完全培養基，放進細胞培養箱繼續培養48~72h。3)48~72h后收集上層培養液，并過μm濾膜，采用ELISA法對所獲得的慢載體進行滴度測定。如不及時使用可以凍存于-80℃。3、慢轉染1)轉染前1天將細胞接種6孔培養板，時細胞的融合率約為50%，前需換液，加入1mLDMEM完全培養基。2)冰浴融化后加入相應體積的液及聚凝胺（Polybrene），混勻后放入37℃孵箱中繼續培養3)4h后補充1mL培養基，14h后換液（24h內換液即可）。4)72h后用倒置顯微鏡觀察熒光，監測效率，出現較多熒光時將等量的轉染細胞和未轉染細胞分別加入等濃度Puromycin（Puromycin或其他篩選濃度需要事先摸索）。5)待未轉染細胞全部死亡并且可觀察到滿意熒光量時，降低Puromycin濃度培養。也可以挑去單克隆細胞株進行進一步培養，以得到滿意的穩定表達目的基因的細胞株。6)使用qRT-PCR和Westernblot的方法檢測目的基因的表達量和蛋白水平是否顯著提高。7)由此可得三組細胞株：a.正常細胞株；b.空載載體的細胞株。

    如胰腺，一般取胰島較多的胰腺尾部；肺應取有細支氣管及帶有軟骨片的小支氣管部。如果實驗需進行多樣本的采集，采集順序應按照：消化，神經系統，皮膚，肌肉等的順序進行。選好塊的切面。熟悉某些成分安排，然后決定其切面的走向；如一長管狀以橫切面較好。切除不需要的部分。特別是周圍的脂肪等，應盡可能掉，否則給固定、脫水、浸蠟、切片等帶來一些不必要的問題。樣品的固定（1）固定的方法：①小塊固定法：從動物取下的小塊，立即置入液態固定劑（這是應用經常的方法）。②注射/灌注固定法：某些塊由于體積過大或固定液極難滲入內部或需要對整個臟器或整個動物進行固定，這時宜采用注射固定法，將固定液注入血管，經血管分支到達整個和全身，從而得到充分的固定。另，空腔比如肺，肺內含有空氣，固定液難以滲入，建議先做肺灌注，使得肺充盈滿固定液以后再進行保存，如果空腔中氣體沒有排出，后續可能影響固定效果（沒有灌注的肺會浮在液體表面不利于固定，切片以后也會看到很多的空泡）。③蒸汽固定法：比較細小而薄的標本，可用鋨酸或甲醛蒸汽固定。主要用于血液或細胞涂片以及某些薄膜的固定。。實驗干貨 | 分子克隆實驗——無縫克隆。

    這種細胞保持著其原始的生物學特性，具有高度的活性和分裂能力。原代細胞在許多生物醫學研究中具有重要地位，包括藥物篩選、疾病模型的建立以及疫苗研發等。原代細胞的獲得通常是通過組織剪切、消化或酶解等方式從機體或組織中分離出來。這些細胞脫離了它們在生物體中的環境，但是仍然保持著其基本的生物學特性，包括細胞膜、細胞核、細胞器以及其他重要的生物分子。原代細胞在未經過傳代培養的情況下，保持著其原始的生物學特性，因此，它們常常被用于藥物篩選、毒理學研究等。同時，由于原代細胞具有高度活性和分裂能力，它們也被用于組織工程和再生醫學中，如皮膚移植、骨頭修復和神經再生等。此外，原代細胞模型在疾病研究中也扮演著重要角色。由于原代細胞具有更高的生物真實性，使用它們建立的疾病模型能夠更準確地模擬疾病的發展過程和藥物的作用機制，從而為新藥研發和疾病治、療提供更有效的工具。總之，原代細胞是一種具有高度活性和分裂能力的細胞，在生物醫學研究中具有重要的作用。由于其原始的生物學特性。EdU細胞增殖檢測是一種快速、準確、靈敏的細胞增殖檢測方法.海南病理科研技術服務構建

隨著科技的不斷進步，科研人員將能夠開發出更為精確、實用的動物模型，更好地為人類健康保駕護航。湖北組織科研技術服務技術

    準備碎冰和。把膜置于甲醇溶液中活化1分鐘，然后轉移至轉膜液中平衡3分鐘后備用。2、轉膜組裝轉膜三明治夾，這一步很關鍵，重要的是膠和膜之間不能有氣泡且膜與膠要保證貼合緊密(否則會翻車)，可以加多點轉膜液泡著。組裝好后加滿轉膜液，設置電源參數，我習慣恒流轉膜，200-280毫安，1-2小時，根據分子量定，如50KD的分子用60分鐘就夠了。如果一個電源帶兩個轉膜大槽即四塊膠，我就會用恒壓70-110V。這個過程重要的是做好降溫。這里簡單說一下蛋白分子量與玻璃板厚度，分離膠的濃度，轉膜電源參數的選擇問題。如果是能用1毫米的玻璃板就不用，因為轉膜是在電場的作用下蛋白分子從膠上遷移到膜上，1毫米膠的蛋白遷移距離要比。選擇更薄的膠蛋白轉膜時間可以減少，從而減少發熱，以免膠變形，條帶也會更好看。然后是分離膠的濃度，如果是150—200KD的分子選10%以下的的分離膠，200—300KD的選8%的,300KD以上的選6%的，小于30KD的200mA30分鐘，30-100KD的按分子量的數值算，如70KD，250mA70分鐘;100-150KD的250mA100分鐘;150—300KD的分子轉膜條件用280毫安(以上均是對于，)，120分鐘足矣，前提是膠的濃度相適應。五、封閉孵一抗1、封閉轉膜結束后。湖北組織科研技術服務技術