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來源: 發(fā)布時間:2024-05-10

特別推薦應(yīng)用(提供實驗報告作為參考) Microcon?超濾管: Microcon?PCR 級超濾管: ? 法醫(yī)鑒定分析的DNA樣品制備 ? 生物大分子樣品濃縮、脫鹽及緩沖液置換 ? 體外合成mRNA的純化 ? 以人mRNA或總RNA制備熒光DNA探針 ? 游離標(biāo)記物的去除 ? 納克級核酸的定量回收及大片段DNA完整性研究 ? 替代乙醇沉淀,離心法高效濃縮基因組DNA 應(yīng)用指南 典型應(yīng)用 肽及生長因子濃縮 蛋白濃縮與脫鹽 電泳等操作前的蛋白樣品濃縮 HPLC前去除蛋白 組織培養(yǎng)抽提物和細(xì)胞裂解液中大分子成分的純化 生物樣本濃縮(抗原,抗體,酶等) 從含有SDS(或無SDS)的緩沖液中濃縮gDNA 核酸濃縮與脫鹽(單鏈或雙鏈核酸) 去除標(biāo)記核苷酸 去除標(biāo)記氨基酸 從擴(kuò)增的DNA產(chǎn)物中去除引物 克隆前去除連接序列(linker)超濾濃縮管的系列有很多。奉賢區(qū)Merck離心濃縮管訂購

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微濾中膜的孔徑大小通常以微米計,表示大于這一規(guī)格的顆粒將被膜截留。超濾膜根據(jù) NMWL分級,有時也用截留分子量(MWCO)。NMWL表示大多數(shù)大于這個值的分子將在超濾時截留。一個確定NMWL的超濾膜應(yīng)該截留至少90%以上的這個大小的球形分子。但為了保險起見,實踐中選擇的膜孔徑要小于目的分子。緩沖液置換時膜截留分子量應(yīng)該充分大于流過的溶質(zhì)。當(dāng)膜材料相同時,孔徑減小 會增加排阻而減小濾過率。截留及產(chǎn)物回收的影響因素包括分子的形狀、帶電性質(zhì)、樣品濃度及組成成分、操作條件、使用的設(shè)備構(gòu)造等。因此常常發(fā)生同樣 NMWL 的膜對一定范圍內(nèi)的不同分子截留效果有一定差異的情況。使用超濾方法進(jìn)行樣品濃縮或除鹽時,需要謹(jǐn)慎地選擇合適的NMWL膜和設(shè)備。崇明區(qū)默克超濾濃縮管Millipore超濾濃縮管用于蛋白超濾、濃縮、除鹽!

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外泌體用于細(xì)胞學(xué)或動物實驗前的無菌處理 已經(jīng)經(jīng)過上述方法制備的外泌體在進(jìn)行細(xì)胞或動物實驗之前還需進(jìn)行一步除菌過濾,這個時候考慮到得率,應(yīng)該采用離心法處理,以減少過濾時的外泌體樣品損失。 超濾方法純化具體操作步驟舉例 Amicon? Ultra-15 超濾管 (10 kDa MWCO) 用Steriflip?真空抽濾對樣品進(jìn)行澄清[目錄號SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜] 用PBS平衡Amicon? Ultra-15 超濾管(目錄號UFC901024,10 kDa MWCO) ,4000g離心 X 10 min。 從超濾管內(nèi)管及收集管吸走PBS。向超濾管加入15 mL 樣品。4000g 離心30 min 濃縮。倒空收集管。加入14 mL PBS 進(jìn)行緩沖液置換,溫柔吸打樣品數(shù)次。4000g離心 30 min。從濃縮管吸回處理好的樣品。(30X 濃縮) 注意 : 所有 Amicon? Ultra 超濾管 (0.5, 2, 4 和 15 mL) 與此操作流程兼容 *

特點(diǎn)與優(yōu)點(diǎn): 高產(chǎn):沒有樣品轉(zhuǎn)移,損失更少 溫和:特別的滲濾設(shè)計使換液過程更溫和 快速:從細(xì)胞裂解到純化、優(yōu)化一共需要5次低速離心 靈活:一種離心方法,***支持各種樣品制備所需 蛋白緩沖液置換、脫鹽和透析 每一種蛋白的制備都是***的,常常需要摸索和優(yōu)化。應(yīng)該考慮為特定蛋白選擇相應(yīng)的工具進(jìn)行換液和透析。您可以從操作較快 Amicon? Pro 的滲濾法或更溫和的 D-Tube?透析法中選擇更適合樣品的操作方法。 選擇更直接而有效的方法! Amicon? Pro能做到一步離心完成脫鹽換液超濾濃縮管的優(yōu)缺點(diǎn)您知道嗎?

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上樣池下端接上Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管(有5種截留分子量規(guī)格可選)。 6. 加入1 mL洗脫緩沖液與樹脂混勻。孵育5 min。 7. 4,000×g離心15 min。 8. 加上蛋白樣品**終需要的緩沖液1.5 mL。4,000×g離心15 min,置換緩沖液的同時進(jìn)行濃縮。 9. 倒轉(zhuǎn)Amicon? Ultra 0.5 mL超濾管,1,000×g離心回收純化和濃縮好的蛋白。 * 本操作受Amicon? Ultra-0.5 mL超濾管~1 mg蛋白的容量限制。體積較大而蛋白濃度較低的情況下也可以采用如上方法,但溶液體積和離心時間等需要略加優(yōu)化。 用Protein A或G對抗體進(jìn)行親和純化超濾濃縮管的系列有很多種。虹口區(qū)默克15ml超濾濃縮管規(guī)格

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核苷酸截留分子量(NCO) 超濾膜的 NMWL 是用球形蛋白標(biāo)定的,適合各種蛋白研究,但在核酸 和多糖純化時則要考慮更多因素。這些分子的棒狀的三維結(jié)構(gòu)容易漏 過,相對于球形蛋白需要更致密的膜(截留分子量更小)。所以選擇 濾膜是更多考慮的是核苷酸長度而非分子量。 濃差極化 濃差極化實質(zhì)是溶質(zhì)累積在膜表面造成的堵塞,產(chǎn)生除了膜本身截留分 子量以外的過濾限制。當(dāng)溶質(zhì)濃度較高時,會形成相當(dāng)于第二層濾膜作 用的膠體層,干擾分子通過濾膜,同時降低流速。pH 值、緩沖液的成分 也會影響目的分子的狀態(tài)而使?jié)獠顦O化現(xiàn)象加劇或減輕。奉賢區(qū)Merck離心濃縮管訂購

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