聚合酶鏈反應：等位基因特異性聚合酶鏈反應:基于單核苷酸變異的診斷或克隆技術(snv不要與 SNPs 混淆)(患者的單堿基差異)。它需要事先知道DNA序列，包括等位基因之間的差異，并使用3’端包含SNV的引物(通常包含SNV周圍的堿基對緩沖液)。在模板和引物不匹配的情況下，嚴格條件下的PCR擴增效率要低得多，因此用單核苷酸多態性特異性引物成功擴增表明序列中存在特異性單核苷酸多態性。有關更多信息，請參見單核苷酸多態性基因分型。裝配聚合酶鏈反應或者聚合酶循環組件:通過對具有短重疊片段的長寡核苷酸池進行PCR來人工合成長DNA序列。寡核苷酸在有義和反義方向之間交替，重疊片段決定聚合酶鏈反應片段的順序，從而選擇性地產生很終的長DNA產物。流聚合酶鏈反應：一種偽等溫PCR方法。南京特殊樣本Real-time PCR服務

聚合酶鏈式反應的常見問題：出現非特異性擴增帶：PCR擴增后出現的條帶與預計的大小不一致，或大或小，或者同時出現特異性擴增帶 與非特異性擴增帶。非特異性條帶的出現，其原因：一是引物與靶序列不完全互補、或引物聚合形成二聚體。二是Mg2+離子濃度過高、退火溫度過低，及PCR循環次數過多有關。其次是酶的質和量，往往一些來源的酶易出現非特異條帶而另一來源的酶則不出現，酶量過多有時也會出現非特異性擴增。其對策有：必要時重新設計引 物。減低酶量或調換另一來源的酶。降低引物量，適當增加模板量，減少循環次數。適當提高退火溫度或采用二溫度點法（93℃變性，65℃左右退火與延伸）。徐州組織熒光定量PCR應用流聚合酶鏈反應將溶液置于熱梯度下，而不是反復加熱和冷卻聚合酶鏈反應混合物。

聚合酶鏈式反應的常見問題：PCR產物的電泳檢測時間一般為48h以內，有些很好于當日電泳檢測，大于48h后帶型不規則甚至消失。假陰性：不出現擴增條帶。PCR反應的關鍵環節有模板核酸的制備，引物的質量與特異性，酶的質量及溴乙錠的使用， PCR循環條件。尋找原因亦應針對上述環節進行分析研究。模板：模板中含有雜蛋白質，模板中含有Taq酶抑制劑，模板中蛋白質沒有消化除凈，特別是染色體中的組蛋白，在提取制備模板時丟失過多，或吸入酚。模板核酸變性不徹底。在酶和引物質量好時，不出現擴增帶，極有可能是標本的消化處理，模板核酸提取過程出了毛病，因而要配制有效而穩定的消化處理液，其程序亦應 固定不宜隨意更改。

聚合酶鏈式反應準備：PCR所用的酶主要有兩種來源：Taq和Pfu，分別來自兩種不同的噬熱菌。其中Taq擴增效率高但易發生錯配。Pfu擴增效率弱但有糾錯功能。所以實際使用時根據需要必須做不同的選擇。模板即擴增用的DNA，可以是任何來源，但有兩個原則，純度必須較高，第二濃度不能太高以免抑制。緩沖液的成分很為復雜，除水外一般包括四個有效成分：緩沖體系，一般使用HEPES或MOPS緩沖體系；一價陽離子，一般采用鉀離子，但在特殊情況下也可使用銨根離子；二價陽離子，即鎂離子，根據反應體系確定，除特殊情況外不需調整；輔助成分，常見的有DMSO、甘油等，主要用來保持酶的活性和幫助DNA解除纏繞結構。熱啟動聚合酶鏈式反應可以通過將反應組分加熱到變性溫度在加入聚合酶之前。

聚合酶鏈式反應：反應的控制：PCR反應的緩沖液 提供合適的酸堿度與某些離子；鎂離子濃度 總量應比dNTPs的濃度高，常用1.5mmol/L；底物濃度 dNTP以等摩爾濃度配制，20～200umol/L；TaqDNA聚合酶 2.5U(100ul）；引物濃度一般為0.1 ～ 0.5umol/L；反應溫度和循環次數；變性溫度和時間 95℃，30s；退火溫度和時間 低于引物Tm值5 ℃左右，一般在45～55℃；延伸溫度和時間 72℃，1min/kb(10kb內）；Tm值=4(G+C) +2(A+T)；循環次數 ：一般為25 ～ 30次。循環數決定PCR擴增的產量。模板初始濃度低，可增加循環數以便達到有效的 擴增量。但循環數并不是可以無限增加的。一般循環數為30個左右，循環數超過30個以后，DNA聚合酶活性逐漸達到飽和，產物的量不再隨循環數的增加而增加，出現了所謂的“平臺期”。重疊延伸聚合酶鏈反應：一種用于將兩個或多個含有互補序列的DN段拼接在一起的基因工程技術。南京特殊樣本Real-time PCR服務

聚合酶鏈式反應（PCR）是一種用于放大擴增特定的DN段的分子生物學技術。南京特殊樣本Real-time PCR服務

基于聚合酶鏈反應的遺傳(或脫氧核糖核酸)指紋圖譜協議的發展已在法醫學中得到較廣應用：遺傳指紋以其辨別力的形式，可以從世界上所有人群中獨特地區分任何一個人。微小的DNA樣本可以從犯罪現場，和比較的從嫌疑人那里，或者從DNA資料庫早期的證據或罪犯。這些測試的簡單版本通常用于在刑事調查中快速排除嫌疑人。幾十年前的犯罪證據可以被檢驗，確認或免責很初被定罪的人。脫氧核糖核酸指紋中較小的區別有助于親子鑒定，在親子鑒定中，一個人和他的近親相匹配。可以測試未知人類遺骸的DNA，并與可能的父母、兄弟姐妹或兒童進行比較。類似的測試可以用來確認被收養(或)孩子的親生父母。新生兒的實際生父也可以被確認(或排除)。南京特殊樣本Real-time PCR服務

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