聚合酶鏈式反應準備：PCR所用的酶主要有兩種來源：Taq和Pfu，分別來自兩種不同的噬熱菌。其中Taq擴增效率高但易發生錯配。Pfu擴增效率弱但有糾錯功能。所以實際使用時根據需要必須做不同的選擇。模板即擴增用的DNA，可以是任何來源，但有兩個原則，純度必須較高，第二濃度不能太高以免抑制。緩沖液的成分很為復雜，除水外一般包括四個有效成分：緩沖體系，一般使用HEPES或MOPS緩沖體系；一價陽離子，一般采用鉀離子，但在特殊情況下也可使用銨根離子；二價陽離子，即鎂離子，根據反應體系確定，除特殊情況外不需調整；輔助成分，常見的有DMSO、甘油等，主要用來保持酶的活性和幫助DNA解除纏繞結構。如果基因的基因組DNA序列是已知的，逆轉錄-聚合酶鏈反應可以用來繪制基因中外顯子和內含子的位置。武漢實時Real-time PCR應用

聚合酶鏈反應：嵌套聚合酶鏈反應:通過減少DNA非特異性擴增的背景，提高DNA擴增的特異性。兩組引物用于兩個連續的PCR。在個反應中，一對引物用于產生DNA產物，除了預期的靶之外，該產物可能仍然由非特異性擴增的DN段組成。然后用一組引物將產物用于第二次聚合酶鏈反應，所述引物的結合位點完全或部分不同于次反應中使用的每個引物，并且位于其中的3’。嵌套式PCR在特異性擴增長DN段方面通常比傳統PCR更成功，但它需要更詳細的目標序列知識。重疊延伸聚合酶鏈反應或者通過重疊延伸拼接(SOEing):一種用于將兩個或多個含有互補序列的DN段拼接在一起的基因工程技術。它用于連接含有基因、調節序列或突變的DN段；這項技術可以創造特定的長DNA構建體。它還可以將缺失、插入或點突變引入DNA序列。武漢實時Real-time PCR應用聚合酶鏈反應很容易理解和使用，并迅速產生結果。

聚合酶鏈式反應：定量PCR允許實時定量和檢測特定的DNA序列，因為它在合成過程中測量濃度。有兩種方法可以同時檢測和定量。種方法是使用在DNA雙鏈之間非特異性保留的熒光染料。第二種方法涉及編碼特定序列并被熒光標記的探針。只有在探針與其互補DNA雜交后，才能使用這些方法檢測DNA。一種有趣的技術組合是實時PCR和逆轉錄。這種復雜的技術被稱為RT-qPCR，允許定量少量RNA。通過這種組合技術，mRNA被轉化為cDNA，并用qPCR進一步定量。這種技術降低了聚合酶鏈反應終點出錯的可能性，增加了檢測與遺傳疾病如病癥相關的基因的機會。實驗室使用RT-qPCR來靈敏地測量基因調控。

聚合酶鏈反應：流聚合酶鏈反應:一種偽等溫PCR方法。將溶液置于熱梯度下，而不是反復加熱和冷卻聚合酶鏈反應混合物。由此產生的熱不穩定性驅動對流流動自動將聚合酶鏈反應試劑從熱區域和冷區域打亂，從而反復啟動聚合酶鏈反應。通過利用混沌流場的出現，可以優化熱邊界條件和PCR外殼的幾何形狀等參數，以產生特異和快速的PCR。這種對流聚合酶鏈反應設置明顯降低了設備功率需求和操作時間。逆轉錄聚合酶鏈反應(逆轉錄-聚合酶鏈反應):用于從RNA中擴增DNA。逆轉錄酶將核糖核酸逆轉錄成cDNA ，然后通過聚合酶鏈反應進行擴增。逆轉錄-聚合酶鏈反應較廣用于表達譜，以確定基因的表達或鑒定RNA轉錄物的序列，包括轉錄起始和終止位點。如果基因的基因組DNA序列是已知的，逆轉錄-聚合酶鏈反應可以用來繪制基因中外顯子和內含子的位置。基因的5’端(對應于轉錄起始位點)通常通過 RACE-PCR (快速擴增cDNA末端)中。聚合酶鏈式反應（PCR）是一種用于放大擴增特定的DN段的分子生物學技術。

序列標簽站點是一個過程，其中PCR被用作基因組的特定片段存在于特定克隆中的指示物。人類基因組計劃發現這一應用對于繪制他們測序的粘?？寺∫约皡f調不同實驗室的結果至關重要。聚合酶鏈反應的一個令人興奮的應用是對來自遠古來源的DNA進行系統進化分析，例如在尼安德特人的復原骨骼中、從猛犸的冷凍組織中或從埃及木乃伊的大腦中發現的DNA已經被放大和測序。]在某些情況下，這些來源的高度降解的DNA可能在擴增的早期階段重新組裝。聚合酶鏈反應的一個常見應用是對以下基因表達模式的研究。組織(甚至單個細胞)可以在不同階段進行分析，以了解哪些基因變得活躍，哪些基因被關閉。該應用還可以使用定量聚合酶鏈反應來定量表達的實際水平。序列間特異性聚合酶鏈反應是一種用于DNA指紋識別的聚合酶鏈反應方法。武漢實時Real-time PCR應用

現在有些PCR因為擴增區很短，即使Taq酶活性不是很好也能在很短的時間內復制完成。武漢實時Real-time PCR應用

聚合酶鏈反應的常見問題分析與解決方法：PCR產物量過少：退火溫度不合適。以2度為梯度設計梯度PCR反應優化退火溫度。DNA模板量太少。增加DNA模板量。PCR循環數不足。增加反應循環數。引物量不足。增加體系中引物含量。延伸時間太短。以1 kb/min的原則設置延伸時間。變性時間過長。變性時間過長會導致DNA聚合酶失活。DNA模板中存在抑制劑。確保DNA模板干凈。擴增產物在凝膠中涂布或成片狀條帶彌散：酶量過高。減少酶量；酶的質量差，調換另一來源的酶。dNTP濃度過高。減少dNTP的濃度。武漢實時Real-time PCR應用