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來源: 發布時間:2021-10-27

    pcrmix:反應條件:pcr擴增產物的電泳鑒定結果如圖3所示,從圖3中可以看出,6、8、9號為pirb基因敲入小鼠在、,wt小鼠pcr產物沒有這兩個擴增產物。(c)短鏈pcr反應,引物如下:primers(℃):forwardprimer(f4):5’-aacaatcaggctgccgaatctg-3’reverseprimer(r4):5’-ctttattagccagaagtcagatgc-3’expectedpcrproduct:targetedallele:344bppirb基因敲入型小鼠能夠擴增出344bp的產物,而野生型沒有。pcr體系:反應條件:(2)f1代小鼠測序:通過pcr擴增后測序鑒定小鼠基因型,如圖4所示,為6號pirb基因敲入小鼠測序峰圖,pcr所用引物如下:sequencingprimerforpcrproduct1:5’sequenceprimer(f3):5’-cacttgctctcccaaagtcgctc-3’sequencingprimerforpcrproduct2:3’sequenceprimer(r3):5’-atactccgaggcggatcacaa-3’(3)southern雜交檢測f1代小鼠基因型:采用bamhi和avrii核酸內切酶切割dna分子,切割示意圖如圖5。具體的southern雜交檢測過程如下:步驟a、提取f1代小鼠尾部dna;步驟b、制備探針,通過pcr方法將dig-dutp滲入到步驟a的dna分子中。疾病動物模型建模好做嗎?閔行區口碑好的疾病動物模型建模

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    技術領域:本發明屬于遺傳學和生物技術領域,具體涉及pirb基因敲入的小鼠動物模型,還涉及上述小鼠動物模型的構建方法。背景技術:鼠源成對免疫球蛋白樣受體b(pairedimmunoglobulin-likereceptorb,pirb),是人類免疫球蛋白樣受體b2(humanleukocyteimmunoglobulin(ig)-likereceptorb2,lilrb2)的同源基因,pirb基因(ncbireferencesequence:)位于小鼠的7號染色體近端,總大小為,編碼841個氨基酸,目前鑒定出15個外顯子,外顯子1起始密碼為atg,外顯子15的終止密碼子是tga(轉錄本:)。pirb蛋白屬于i型跨膜糖蛋白,包含由六個免疫球蛋白樣結構域(domain,d)組成(d1-d6)的胞外段,一個疏水的跨膜段,三個免疫受體酪氨酸依賴的抑制序列(immunoreceptortyrosinebasedinhibitorymotifs,itims)和一個itims樣序列組成的胞內段。理論上講,pirb的分子量約為92kd,但是western-blot分析中,pirb經常位于105kd處,因為pirb是糖蛋白。以往研究發現,pirb在免疫系統和中樞調節中均發揮重要作用。在免疫系統中,pirb在許多造血細胞都有表達,包括b細胞、肥大細胞、巨噬細胞、粒細胞和樹突細胞,但是在胸腺細胞、成熟的t細胞和自然殺傷細胞不表達。鹽城視覺疾病動物模型建模避免了在人身上進行實驗所帶來的風險。

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    可以對本發明進行各種變化和修飾。本發明對試驗中所使用到的材料以及試驗方法進行一般性和/或具體的描述。雖然為實現本發明目的所使用的許多材料和操作方法是本領域公知的,但是本發明仍然在此作盡可能詳細描述。下述實施例中所涉及的儀器、試劑、材料等,若無特別說明,均為現有技術中已有的常規儀器、試劑、材料等,可通過正規商業途徑獲得。下述實施例中所涉及的實驗方法,檢測方法等,若無特別說明,均為現有技術中已有的常規實驗方法,檢測方法等。實施例1:建立大鼠卵巢早衰模型步驟如下:將%氯化鈉溶液50ml加入規格為10mg的醫用順鉑(齊魯制藥,批號:aa1a8029a)中,配制成2mg/kg順鉑注射液,按照10ml/kg連續腹腔注射7天。實施例2:建立大鼠卵巢早衰模型步驟如下:將%氯化鈉溶液(齊魯制藥,批號:aa1a8029a)中,配制成3mg/kg順鉑注射液,按照10ml/kg連續腹腔注射7天。實施例3建立大鼠卵巢早衰模型步驟如下:將%氯化鈉溶液25ml加入規格為10mg的醫用順鉑(齊魯制藥,批號:aa1a8029a)中,配制成4mg/kg順鉑注射液,按照10ml/kg分別在***天及第八天腹腔注射。實施例4:建立大鼠卵巢早衰模型步驟如下:將%氯化鈉溶液(齊魯制藥,批號:aa1a8029a)中。

誘發性**模型的原理是利用外源性致*因素引起細胞遺傳特性異常而呈現出異常生長和高增殖活性,形成**。致*因素主要有化學性、物理性及生物性致*物,而化學性致*物(chemicalcarcinogens)**常見,已確知的多達一千余種,用于誘發實驗性**的種類亦很多,如苯并薩,申基膽菌、聯苯胺、亞硝胺類、黃曲霉***類。各種致癢物的致*強度、致*譜等特性相差較大,同一種致*物經不同途徑給藥所致**部位或類型可有很大差異。有些化學性致*物具有明顯的親***或組織特性。因此,實驗工作中應根據需要選用適當致*物和致*途徑,并確定其他影響因素或實驗條件。基本原理:利用外源性致*物引起細胞遺傳特性改變,從而出現異常生長和高增殖活性細胞形成**。外源性致*物主要有化學性、物理性(如放射性物質)及生物性(如誘發動物**的病毒),其中以化學性致*物**為常用便于研究者按實驗目的需要隨時采取各種樣品。

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    f1代小鼠southern印記的5’探針引物如下:primersfor5’probe:5’probeforwardprimer:5’-aaacgtggagtaggcaatacccagg-3’5’probereverseprimer:5’-aaagaagggtcacctcagtctccct-3’primersfor3’probe:3’probeforwardprimer:5’-ttctgggcaggcttaaaggctaac-3’3’probereverseprimer:5’-aggagcgggagaaatggatatgaag-3’southern印記的目標片段大小如下:5’probe-bamhi:3’probe-avrii:。步驟c、采用限制性內切酶bamhi和avrii對dna進行切割;瓊脂糖凝膠電泳分離dna;步驟d、將dna轉到尼龍膜上;步驟e、探針變性后,與dna分子進行雜交,nbt/bcip化學顯色法顯色,拍照觀察。southern雜交結果如圖6所示,可以看到:6、8、9號pirb基因敲除小鼠如果被bamhi切割,在,wt小鼠只在,如果被avrii切割,pirb基因敲除小鼠在,wt小鼠只在。步驟6、將f1代雜合子小鼠近交獲得f2代純合子pirb基因敲入小鼠,即為本發明所述小鼠pirb基因敲入的動物模型。將本發明獲得的動物模型f2代純合子小鼠與同品系小鼠組織/細胞特異性cre表達的小鼠雜交,獲得f3代小鼠,可以實現在不同組織或者細胞類型中敲入pirb基因。對f3代小鼠進行基因型的鑒定:含有無(pirb-cwt)、一個(pirb-chet)或者兩個。模型應適用于多數研究者使用,容易復制,實驗中便于操作和采集各種標本。常州疾病動物模型建模廠家

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球囊拉傷致高脂血癥動脈硬化兔模型,實驗動物種屬:新西蘭兔,實驗動物環境:SPF級 1、實驗方法:用球囊拉傷誘導法。采用3%戊巴比妥鈉耳緣靜脈注射麻醉,經右股淺動脈,將3.5F球囊擴張導管插至腹主動脈20cm,球囊充液膨脹至2個大氣壓緩慢拉出,反復3次。球囊拉傷手術后,動物喂以高脂飼料,連續9周,每天給料兩次,自由飲水。實驗結束后取腹主動脈斑塊進行組織病理學檢查。2、檢測標準:腹主動脈斑塊病理鏡下可見腹主***程度的改變。閔行區口碑好的疾病動物模型建模

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