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泌尿疾病動(dòng)物模型建模

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-06-28

具體實(shí)施方式下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式對(duì)發(fā)明作進(jìn)一步闡述。本發(fā)明構(gòu)建了pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型,將pirb基因敲入c57bl/6j小鼠的rosa26基因的內(nèi)含子1內(nèi)。具體來說,構(gòu)建一個(gè)cagpromoter-loxp-stop-loxp-kozak-mousepirbcds-polya的基因盒,將其克隆進(jìn)入rosa26基因的內(nèi)含子1中。rosa26基因(ncbireferencesequence:)位于小鼠的七號(hào)染色體。本發(fā)明pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法,具體按照以下步驟具體實(shí)施:步驟1、根據(jù)小鼠rosa26基因(genebank:))序列,利用cas-desigher軟件在1號(hào)內(nèi)含子設(shè)計(jì)grna靶序列,并搜索小鼠dbm-db基因組數(shù)據(jù)庫(kù)基因,采用crispr脫靶效應(yīng)軟件cas-offinder檢測(cè)潛在的脫靶位點(diǎn):**終選取兩個(gè)grna,grna1的基因序列如seqid**所示,grna2的基因序列如:seqid**:ggcaggcttaaaggctaacctgg將grna1和grna2分別與trancrrna在25℃孵育10min形成二級(jí)結(jié)構(gòu);步驟2、利用c57bl/6小鼠文庫(kù)bac克隆,通過pcr擴(kuò)增獲得pirb基因cds的同源臂,采用in-fusion方法構(gòu)建含有cagpromoter-loxp-stop-loxp-kozak-mousepirbcds-polya的基因盒的質(zhì)粒打靶載體,通過酶切、pcr及測(cè)序?qū)Υ虬匈|(zhì)粒載體進(jìn)行驗(yàn)證,圖1為構(gòu)建好的pirb基因打靶載體的示意圖。如何定義好的小鼠疾病模型?泌尿疾病動(dòng)物模型建模

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即為本發(fā)明構(gòu)建的一種pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型。本發(fā)明所采用第二種技術(shù)方案的特點(diǎn)還在于,步驟1中得到grna1和grna2后分別與trancrrna在25℃孵育10min形成二級(jí)結(jié)構(gòu)。步驟3中g(shù)rna1、grna2的濃度均為2~10pmol/ul,cas9蛋白的注射濃度為30~100ng/μl。步驟4中southern雜交采用bamhi和avrii核酸內(nèi)切酶切割f1代雜合子小鼠的dna。本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明提供了pirb基因敲入的小鼠動(dòng)物模型及其構(gòu)建方法,本發(fā)明的小鼠動(dòng)物模型對(duì)于pirb基因功能的研究和在體驗(yàn)證提供了良好的基礎(chǔ)。分離自pirb基因敲入小鼠的細(xì)胞還可以用于研究pirb發(fā)揮調(diào)節(jié)作用的下游機(jī)制。通過pirb敲入動(dòng)物模型與不同類型cre小鼠的雜交,可以用于研究ad不同***或不同細(xì)胞類型pirb的調(diào)節(jié)作用。常州疾病動(dòng)物模型建模供應(yīng)商小鼠是人類疾病理想的動(dòng)物模型不僅因?yàn)樾∈笤谏砩吓c人類極為相似而且小鼠的遺傳資源非常豐富。

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另外pirb在髓細(xì)胞和b細(xì)胞的表達(dá)隨細(xì)胞分化增加。在免疫系統(tǒng),pirb作為主要組織相容性復(fù)合物1(classimajorhistocompatibilitycomplex,mhc1)的受體,參與免疫調(diào)節(jié),包括中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞整合素通路、細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞、b淋巴細(xì)胞和體液—細(xì)胞免疫應(yīng)答等。pirb的前兩個(gè)細(xì)胞外免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域(d1-d2)介導(dǎo)mhci和pirb的結(jié)合。在系統(tǒng)(centralnervoussystem,cns),pirb在許多腦區(qū)包括皮層、海馬、小腦和嗅球都有表達(dá),但在成年脊髓不表達(dá)。在細(xì)胞層面,pirb不僅表達(dá)于神經(jīng)元,也表達(dá)于星形膠質(zhì)細(xì)胞。在許多病理?xiàng)l件下,如腦外傷、中風(fēng)和cns,pirb的mrna和蛋白表達(dá)水平增加。

1、動(dòng)物模型名稱:橄欖油聯(lián)合酒精致肝硬化門脈高壓大鼠模型2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種屬:SD大鼠3、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物性別:雄性4、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物年齡:5周5、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重:150g-180g6、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境:SPF級(jí)1、實(shí)驗(yàn)方法:橄欖油聯(lián)合酒精誘導(dǎo)。按0.3mL/100g體重,背頸部皮下注射50%CCl4的橄欖油溶液,***注射量加倍(6mL/kg體重),2次/周,皮下注射共13周;造模前4周為10%酒精溶液喂養(yǎng)代替飲水,4周后改為30%酒精溶液灌胃(30%酒精溶液灌胃1mL/100g體重,3次/周)。繼續(xù)正常飼養(yǎng)1個(gè)月。實(shí)驗(yàn)結(jié)束測(cè)量門靜脈血流量(PBF)和腸系膜上動(dòng)脈血流量(SMABF)。處死,取肝臟進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。2、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn):門靜脈及腸系膜上動(dòng)脈血流量情況與正常對(duì)照組比較均增加,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義肝組織病理可見肝硬化病理改變。大量的遺傳變異可作為研究人類疾病的借鑒。

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目前鑒定出15個(gè)外顯子,外顯子1起始密碼為atg,外顯子15的終止密碼子是tga(轉(zhuǎn)錄本:)。pirb蛋白屬于i型跨膜糖蛋白,包含由六個(gè)免疫球蛋白樣結(jié)構(gòu)域(domain,d)組成(d1-d6)的胞外段,一個(gè)疏水的跨膜段,三個(gè)免疫受體酪氨酸依賴的抑制序列(immunoreceptortyrosinebasedinhibitorymotifs,itims)和一個(gè)itims樣序列組成的胞內(nèi)段。理論上講,pirb的分子量約為92kd,但是western-blot分析中,pirb經(jīng)常位于105kd處,因?yàn)閜irb是糖蛋白。以往研究發(fā)現(xiàn),pirb在免疫系統(tǒng)和中樞調(diào)節(jié)中均發(fā)揮重要作用。在免疫系統(tǒng)中,pirb在許多造血細(xì)胞都有表達(dá),包括b細(xì)胞、肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞和樹突細(xì)胞,但是在胸腺細(xì)胞、成熟的t細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞不表達(dá)。小鼠疾病模型研究也是人相關(guān)疾病藥物研發(fā)的起點(diǎn)。小鼠疾病動(dòng)物模型建模

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另外pirb在髓細(xì)胞和b細(xì)胞的表達(dá)隨細(xì)胞分化和***增加。在免疫系統(tǒng),pirb作為主要組織相容性復(fù)合物1(classimajorhistocompatibilitycomplex,mhc1)的受體,***參與免疫調(diào)節(jié),包括中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞整合素通路、細(xì)胞毒性t淋巴細(xì)胞***、b淋巴細(xì)胞***和體液—細(xì)胞免疫應(yīng)答等。pirb的前兩個(gè)細(xì)胞外免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域(d1-d2)介導(dǎo)mhci和pirb的結(jié)合。在***系統(tǒng)(centralnervoussystem,cns),pirb在許多腦區(qū)包括皮層、海馬、小腦和嗅球都有表達(dá),但在成年脊髓不表達(dá)。在細(xì)胞層面,pirb不僅表達(dá)于神經(jīng)元,也表達(dá)于星形膠質(zhì)細(xì)胞。在許多病理?xiàng)l件下,如腦外傷、中風(fēng)和cns***,pirb的mrna和蛋白表達(dá)水平***增加。在cns,pirb是髓鞘抑制因子nogo-a、mag、omgp的受體,參與神經(jīng)元突起芽發(fā)和生長(zhǎng)錐塌陷,抑制神經(jīng)元軸突再生和突觸可塑性。pirb的細(xì)胞外免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域(d3-d6)介導(dǎo)了pirb與nogoa的結(jié)合。近年來關(guān)于阿爾茨海默病(alzheimer’sdisease,ad)研究還發(fā)現(xiàn),pirb是aβ42寡聚體的高親和力受體,親和力達(dá)到納摩爾水平。pirb的前兩個(gè)細(xì)胞外免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域(d1-d2)介導(dǎo)了aβ42寡聚體和pirb的相互作用,導(dǎo)致絲切蛋白(cofilin)信號(hào)通路增強(qiáng)。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)。泌尿疾病動(dòng)物模型建模

上海東寰生物科技有限公司致力于商務(wù)服務(wù),是一家服務(wù)型公司。公司業(yè)務(wù)涵蓋原代細(xì)胞,細(xì)胞增殖與凋亡,細(xì)胞檢測(cè)試劑盒,動(dòng)物疾病模型等,價(jià)格合理,品質(zhì)有保證。公司從事商務(wù)服務(wù)多年,有著創(chuàng)新的設(shè)計(jì)、強(qiáng)大的技術(shù),還有一批專業(yè)化的隊(duì)伍,確保為客戶提供良好的產(chǎn)品及服務(wù)。上海東寰生物立足于全國(guó)市場(chǎng),依托強(qiáng)大的研發(fā)實(shí)力,融合前沿的技術(shù)理念,飛快響應(yīng)客戶的變化需求。

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