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來源: 發(fā)布時間:2025-04-24

電子探針分析是指以聚焦的高速電子來激發(fā)出試樣表面組成元素的特征X射線,對微區(qū)成分進行定性或定量分析的一種材料物理試驗,又稱電子探針X射線顯微分析。電子探針分析的原理是:以動能為10~30千電子伏的細聚焦電子束轟擊試樣表面,擊出表面組成元素的原子內層電子,使原子電離,此時外層電子迅速填補空位而釋放能量,從而產生特征X射線。電子探針的功能主要是進行微區(qū)成分分析。它是在電子光學和X射線光譜學原理的基礎上發(fā)展起來的一種高效率分析儀器。其原理是用細聚焦電子束入射樣品表面,激發(fā)出樣品元素的特征x射線,分析特征X射線的波長(或特征能量)即可知道樣品中所含元素的種類(定性分析),分析X射線的強度,則可知道樣品中對應元素含量的多少(定量分析)。能進行微區(qū)分析。可分析數個μm3內元素的成分。黃浦區(qū)品牌探針推薦貨源

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DNA探針根據其來源分為3種:一種來源于基因組中的基因本身,稱為基因組探針(genomic probe),可以是基因的全序列,或者基因上的一段序列;另一種是從相應的基因經轉錄獲得mRNA,再通過逆轉錄得到的探針,稱為cDNA探針(cDNA probe);此外,還可在體外人工合成20~50個堿基的與基因序列互補的DNA片段,稱為寡核苷酸探針。 [1]基因組DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發(fā)展和應用。要得到一種特異性DNA探針,常常是比較煩瑣的。以細菌為例,細菌的基因組大小約為5×106堿基,約含3000個基因。要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DNA切成小片段后(如用限制性內切酶做不完全水解)分別克隆得到包含基因組的全信息的克隆庫,然后用多種其他菌種的DNA探針來篩選,產生雜交信號的克隆被剔除,***剩下的不與任何其他細菌雜交的克隆則可能含有該細菌特異性DNA片段。黃浦區(qū)品牌探針推薦貨源光學顯微鏡目測系統(tǒng)。用以準確選擇需要分析的區(qū)域,并作光學觀察。

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進行分子突變需要大量的探針拷貝,后者一般是通過分子克隆(molecular cloning)獲得的。克隆是指用無性繁殖方法獲得同一個體、細胞或分子的大量復制品。當制備基因組DNA探針前,應先制備基因組文庫,即把基因組DNA打斷,或用限制性酶作不完全水解,得到許多大小不等的隨機片段,將這些片段體外重組到運載體(噬菌體、質粒等)中去,再將后者轉染適當的宿主細胞如大腸肝菌,這時在固體培養(yǎng)基上可以得到許多攜帶有不同DNA片段的克隆噬菌斑,通過原位雜交,從中可篩出含有目的基因片段的克隆,然后通過細胞擴增,制備出大量的探針。

基因探針,即核酸探針,是一段帶有檢測標記,且順序已知的,與目的基因互補的核酸序列(DNA或RNA)。基因探針通過分子雜交與目的基因結合,產生雜交信號,能從浩瀚的基因組中把目的基因顯示出來。根據雜交原理,作為探針的核酸序列至少必須具備以下兩個條件:①應是單鏈,若為雙鏈,必須先行變性處理。②應帶有容易被檢測的標記。它可以包括整個基因,也可以**是基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之轉錄而來的RNA。DNA探針根據其來源有3種:一種來自基因組中有關的基因本身,稱為基因組探針(genomic probe);另一種是從相應的基因轉錄獲得了mRNA,再通過逆轉錄得到的探針,稱為cDNA探針(cDNA probe)。與基因組探針不同的是,cDNA探針不含有內含子序列。此外,還可在體外人工合成堿基數不多的與基因序列互補的DNA片段,稱為寡核苷酸探針。掃描電子探針儀是美國于1960年制成,不僅能對試樣作點或微區(qū)分析,而且能對樣品表面微區(qū)進行掃描。

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用此探針在DNA文庫中篩選,陽性克隆即是目標蛋白的編碼基因。值得一提的是真核細胞和原核細胞DNA組織有所不同。真核基因中含有非編碼的內含子序列,而原核則沒有。因此,真核基因組DNA探針用于檢測基因表達時雜交效率要明顯低于cDNA探針。DNA探針(包括cDNA探針)的主要優(yōu)點有下面三點:①這類探針多克隆在質粒載體中,可以無限繁殖,取之不盡,制備方法簡便。②DNA探針不易降解(相對RNA而言),一般能有效抑制DNA酶活性。③DNA探針的標記方法較成熟,有多種方法可供選擇,如缺口平移,隨機引物法,PCR標記法等,能用于同位素和非同位素標記。它的作用是選擇和確定分析點。靜安區(qū)優(yōu)勢探針品牌

1953年前蘇聯(lián)制成了X射線微區(qū)分析儀,以后英、美等國陸續(xù)生產。黃浦區(qū)品牌探針推薦貨源

體外轉錄技術不斷完善,已相繼建立了單向和雙向體外轉錄系統(tǒng)。該系統(tǒng)主要基于一類新型載體pSP和pGEM,這類載體在多克隆位點兩側分別帶有SP6啟動子和T7啟動子,在SP6RNA聚合酶或T7RNA聚合酶作用下可以進行RNA轉錄,如果在多克隆位點接頭中插入了外源DNA片段,則可以此DNA兩條鏈中的一條為模板轉錄生成RNA。這種體外轉錄反應效率很高,在1h內可合成近10μg的RNA產生,只要在底物中加入適量的放射性或生物素標記的NTP,則所合成的RNA可得到高效標記。該方法能有效地控制探針的長度并可提高標記物的利用率。黃浦區(qū)品牌探針推薦貨源

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