重組增強型綠色熒光蛋白（RecombinantEnhancedGreenFluorescentProtein,EGFP）是一種用于生物科學研究的工具。以下是重組EGFP的一些特點和應用：1.**高熒光強度**：EGFP比野生型GFP具有更強的熒光，這使得它在成像和檢測時更為敏感和有效。2.**改進的折疊效率**：EGFP在生理溫度（如37℃）下的折疊效率更高，這有助于在細胞內快速形成成熟的熒光蛋白。3.**單一激發(fā)峰**：與野生型GFP相比，EGFP具有單一的激發(fā)峰，這簡化了成像條件的設置，并提高了信號的穩(wěn)定性。4.**適合多種生物系統(tǒng)**：EGFP可以用于多種生物系統(tǒng)，包括細菌、酵母、植物和哺乳動物細胞。5.**多功能性**：EGFP可以作為報告基因用于基因表達分析，也可以作為融合標簽用于蛋白質定位和動態(tài)研究。6.**非糖基化**：在大腸桿菌中表達的重組EGFP是非糖基化的，這有助于減少翻譯后修飾的復雜性。7.**純度高**：重組EGFP通常具有高純度，適合用于各種生物化學和分子生物學實驗。8.**穩(wěn)定性**：EGFP的熒光穩(wěn)定性好，適合長時間觀察和成像。9.**分子量**：重組EGFP的分子量約為26.9kDa，由239個氨基酸構成。牛痘DNA拓撲異構酶I具有解超螺旋的活性，可以解開雙鏈閉合環(huán)狀DNA的超螺旋結構，便于后續(xù)的酶切反應。Recombinant Mouse PSCAProtein,hFc Tag

通過SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝膠電泳）和Westernblot（西方印跡）可以有效地檢測帶有His標簽的泛素蛋白的純度和完整性。以下是進行這些檢測的步驟：###SDS-PAGE步驟：1.**樣品準備**：-將重組泛素蛋白溶解在適當的緩沖液中，通常含有還原劑（如DTT或β-巰基乙醇）以斷裂二硫鍵。-將樣品在95-100°C下加熱5分鐘以變性蛋白質。2.**凝膠準備**：-根據需要的分辨率選擇合適的凝膠濃度（例如，12%或15%凝膠用于檢測20-100kDa的蛋白質）。3.**上樣**：-將變性后的樣品加入到凝膠的相應孔中，同時加入分子量標記物作為參照。4.**電泳**：-在恒定電壓或恒定電流下進行電泳，直到樣品在凝膠中充分分離。5.**染色**：-使用考馬斯亮藍或其他蛋白質染色劑對凝膠進行染色，以可視化蛋白質條帶。6.**分析**：-通過比較樣品條帶與分子量標記物，評估蛋白質的分子量和純度。###Westernblot步驟：1.**轉膜**：-將SDS-PAGE分離的蛋白質從凝膠轉移到PVDF或硝酸纖維素膜上。2.**封閉**：-使用封閉液（如5%脫脂奶粉或1%BSA溶液）封閉膜上未被蛋白占據的部分，以減少非特異性結合。3.**一抗孵育**：-使用特異性識別His標簽的抗體（一抗）與膜上的蛋白質孵育，通常在4°C過夜。Recombinant Mouse PSCAProtein,hFc Tag牛痘DNA拓撲異構酶I是一種來源于牛痘病毒的酶，有多種作用于DNA分子的能力。

EndoS，即糖苷內切酶S（Endo-S），是一種具有高度特異性的酶，它在生物化學研究中有著重要應用，尤其是在糖蛋白和抗體藥物偶聯(lián)物（ADCs）的研究中。以下是EndoS的一些關鍵特點：1.**特異性**：EndoS能夠特異性地識別并切割N-連接糖鏈的殼二糖結構，即在N-乙酰葡糖胺（GlcNAc）和天冬酰胺之間的連接處進行切割。2.**應用**：在制備糖鏈定點ADC化合物中，EndoS被用于將小分子細胞毒藥物“一步”定點連接到抗體糖基化位點，提供了一種重要的技術方法。3.**兼容性**：EndoS對多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性，可以接受不同生物正交基團、熒光基團等衍生物作為底物，實現抗體糖基化修飾。4.**活性**：EndoS的活性對多肽沒有嚴格的要求，可以接受蛋白質、肽、天門冬酰胺或游離聚糖作為底物。但是，對于具有三、四個支鏈的唾液酸化及去唾液酸化的聚糖，EndoS沒有活性。5.**產品形式**：EndoS通常以帶有His標簽的形式存在，便于從反應中去除，這在實驗操作中提供了便利。6.**研究進展**：EndoS在去糖基化方法研究中是一個重要的工具，特別是在研究糖蛋白的多肽部分和多糖部分的結構和功能時。

酵母重組表達的PNGaseF（N-糖苷酶F）是一種用于蛋白質去糖基化實驗的酰胺水解酶，具有以下特點以確保實驗中的活性和穩(wěn)定性：1.**高效性**：具有高比活性，例如750000U/mL，這有助于快速高效地進行去糖基化反應。2.**穩(wěn)定性**：在含有50%甘油的儲存緩沖液中，比較好的活性和穩(wěn)定性可維持長達24個月。3.**使用條件**：可以在原生或變性條件下使用，對于變性條件下的去糖基化，建議添加NP-40以解除SDS的抑制作用。4.**儲存條件**：建議在-15~-25℃保存，有效期1年。5.**酶活定義**：1個酶活力單位指在10μL的反應體系中，37℃條件下1小時從10μg變性RNaseB中除去超過95%的碳水化合物所需要的酶量。6.**操作簡便**：提供了使用說明，包括變性和非變性條件下的蛋白質去糖基化步驟。7.**His標簽**：產品帶有His標簽，便于在實驗中進行純化和檢測。8.**純度**：純度達到95%以上，通過SDS-PAGE和完整ESI-MS進行確定。9.**快速反應**：有些產品如FastPNGaseF，可以在數分鐘內完成徹底且無偏好性地去糖基化。10.**注意事項**：產品供科研使用，操作時應穿戴適當的實驗室防護裝備。遵循這些指導原則和產品說明，可以確保PNGaseF在實驗中的活性和穩(wěn)定性，從而獲得可靠的去糖基化結果。去泛素化酶（Deubiquitinating enzymes, DUBs）可以去除泛素化蛋白上的泛素鏈，使泛素分子得以回收和再利用。

在ADCs（抗體藥物偶聯(lián)物）的制備過程中，確保藥物的穩(wěn)定性和生物活性是至關重要的。以下是幾個關鍵步驟和技術要點：1.**藥物抗體比（DAR）的控制**：DAR是影響ADC穩(wěn)定性的關鍵因素。通過控制DAR和藥物負荷分布，可以促進ADC的穩(wěn)定性。DAR值在2-4之間通常被認為是好的選擇，但后面的DAR值需要通過穩(wěn)定性試驗、體內有效性和藥代動力學共同決定。2.**連接子的選擇**：連接子在化學過程中、血漿循環(huán)以及產品儲存過程中的穩(wěn)定性非常關鍵。連接子的選擇決定了抗體藥物的DAR，并且連接子的穩(wěn)定性影響著ADC的整體穩(wěn)定性。3.**有效載荷的選擇**：有效載荷對ADC的毒性和生物活性至關重要。選擇具有高度細胞毒性且能在靶細胞內有效釋放的有效載荷是必要的。同時，有效載荷及其代謝形式決定了ADC分子的毒性。4.**制劑配方的優(yōu)化**：ADC的制劑配方需要考慮抗體、連接子和有效載荷的穩(wěn)定性和特性。pH值、緩沖液、離子強度、表面活性劑和抗氧化劑等都可能影響ADC的穩(wěn)定性。5.**避免聚集**：ADC的聚集傾向比單獨的抗體更高，因此需要采取措施減少聚集，如使用非離子表面活性劑和優(yōu)化凍干工藝。

在基因編輯中，Pfu DNA Polymerase可以用于精確地引入特定位點的突變，或在基因組中插入特定的DNA序列。Recombinant Mouse PSCAProtein,hFc Tag

EndoS糖苷內切酶S在抗體藥物偶聯(lián)物（ADCs）研究中的應用主要體現在糖鏈定點偶聯(lián)技術上。通過上海藥物所的研究，開發(fā)了一種新穎的糖鏈定點ADC制備策略，利用EndoS2這種糖苷內切酶，可以將小分子細胞毒藥物“一步”定點連接到抗體的糖基化位點，實現了糖鏈定點ADC化合物的制備。定點偶聯(lián)技術相比傳統(tǒng)的隨機偶聯(lián)具有更好的方法指數，能夠提高ADC的均一性和穩(wěn)定性，是當前ADC領域的研究熱點之一。在抗體的Fc結構域N297位，這是一個保守的糖基化位點，通過在該位點引入細胞物質，可以形成具有優(yōu)勢的糖鏈定點ADC化合物（glycosite-specificADCs,gsADCs）。此外，EndoS2對多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性，能夠高效獲得功能修飾的糖工程抗體，并且可以用于抗體的內吞成像研究及糖鏈延伸等功能化研究。研究人員通過這種“一步”制備策略得到的糖鏈定點ADC化合物，在結構均一性、親水性、體外穩(wěn)定性以及體外活性方面表現良好，并且在體內瘤抑制活性方面，相比陽性對照ADC化合物，在低載藥量的情況下具有更強的抑制效果。EndoS酶的這些應用，不僅展示了其在簡化ADC制備流程中的潛力，還有助于推動定點ADC藥物的深入發(fā)展，為未來的生物藥物開發(fā)提供了新的思路和方法。Recombinant Mouse PSCAProtein,hFc Tag