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Recombinant Mouse AMCase/CHIA Protein

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2024-09-08

重組增強(qiáng)型綠色熒光蛋白(RecombinantEnhancedGreenFluorescentProtein,EGFP)是一種用于生物科學(xué)研究的工具。以下是重組EGFP的一些特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**高熒光強(qiáng)度**:EGFP比野生型GFP具有更強(qiáng)的熒光,這使得它在成像和檢測(cè)時(shí)更為敏感和有效。2.**改進(jìn)的折疊效率**:EGFP在生理溫度(如37℃)下的折疊效率更高,這有助于在細(xì)胞內(nèi)快速形成成熟的熒光蛋白。3.**單一激發(fā)峰**:與野生型GFP相比,EGFP具有單一的激發(fā)峰,這簡(jiǎn)化了成像條件的設(shè)置,并提高了信號(hào)的穩(wěn)定性。4.**適合多種生物系統(tǒng)**:EGFP可以用于多種生物系統(tǒng),包括細(xì)菌、酵母、植物和哺乳動(dòng)物細(xì)胞。5.**多功能性**:EGFP可以作為報(bào)告基因用于基因表達(dá)分析,也可以作為融合標(biāo)簽用于蛋白質(zhì)定位和動(dòng)態(tài)研究。6.**非糖基化**:在大腸桿菌中表達(dá)的重組EGFP是非糖基化的,這有助于減少翻譯后修飾的復(fù)雜性。7.**純度高**:重組EGFP通常具有高純度,適合用于各種生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。8.**穩(wěn)定性**:EGFP的熒光穩(wěn)定性好,適合長(zhǎng)時(shí)間觀察和成像。9.**分子量**:重組EGFP的分子量約為26.9kDa,由239個(gè)氨基酸構(gòu)成。在一項(xiàng)研究中,比較了具有不同NLS融合的Cas9蛋白和Cas9 mRNA在斑馬魚(yú)基因組編輯中的效率。Recombinant Mouse AMCase/CHIA Protein,His Tag

Recombinant Mouse AMCase/CHIA Protein,His Tag,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

使用PreScissionProtease進(jìn)行蛋白質(zhì)切割時(shí),為保證高純度和高活性,需要考慮以下關(guān)鍵因素:1.**特異性切割位點(diǎn)**:確保融合蛋白中包含PreScissionProtease特異性識(shí)別的序列,以實(shí)現(xiàn)精確切割。2.**酶與底物的比例**:適當(dāng)比例的酶量對(duì)于高效切割至關(guān)重要,過(guò)多或過(guò)少的酶都可能影響切割效率和純度。3.**反應(yīng)條件**:包括溫度、pH和反應(yīng)時(shí)間等,這些條件需要優(yōu)化以確保酶的活性和選擇性。通常,PreScissionProtease在4°C下進(jìn)行酶切。4.**緩沖液兼容性**:使用與PreScissionProtease兼容的緩沖液,避免使用可能抑制酶活性的離子或化學(xué)物質(zhì)。5.**蛋白濃度**:確保融合蛋白有足夠的濃度,以提高切割效率和減少樣品損失。6.**酶切后的分離**:切割后,需要有效分離目的蛋白和切割下來(lái)的標(biāo)簽,通常利用親和層析等方法。7.**避免蛋白降解**:在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中添加蛋白酶抑制劑,以防止蛋白降解酶對(duì)目的蛋白的降解。8.**避免蛋白質(zhì)聚集**:在切割過(guò)程中,應(yīng)避免條件導(dǎo)致蛋白質(zhì)聚集或沉淀,這可能會(huì)影響純度和活性。9.**避免氧化**:在蛋白質(zhì)處理過(guò)程中,添加抗氧化劑如DTT或TCEP,以防止半胱氨酸殘基的氧化。10.**清潔的實(shí)驗(yàn)環(huán)境**:確保實(shí)驗(yàn)器材和環(huán)境的清潔,避免微生物污染和核酸污染。Recombinant Human LIGHT/TNFSF14(His Tag)Pfu DNA Polymerase 具有較高的保真度,能夠在DNA合成過(guò)程中減少錯(cuò)誤摻入的堿基,降低非目標(biāo)突變的發(fā)生率。

Recombinant Mouse AMCase/CHIA Protein,His Tag,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

PreScissionProtease(PSP)是一種在蛋白質(zhì)純化和分析中使用的酶,具有以下特點(diǎn):1.**特異性識(shí)別**:PSP能在低溫(4°C)下特異性識(shí)別八肽序列Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro或五肽序列Leu-Phe-Gln-Gly-Pro,并在Gln和Gly之間進(jìn)行酶切。2.**應(yīng)用**:PSP常用于去除融合蛋白中的GlutathioneS-transferase(GST)、His等標(biāo)簽,有助于純化目的蛋白。3.**純度高**:PSP的純度達(dá)到95%以上,確保了實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。4.**穩(wěn)定性好**:PSP在含有50%甘油的儲(chǔ)存緩沖液中,-80℃長(zhǎng)期儲(chǔ)存,有效期2年;小量分裝-20℃保存,有效期6個(gè)月。5.**酶活定義**:在5℃條件下反應(yīng)16小時(shí),能夠切割100μg的GST標(biāo)簽蛋白達(dá)90%以上所需的酶量定義為一個(gè)活性單位。6.**兼容性強(qiáng)**:PSP的酶切體系中可以兼容1%TritonX-100、Tween-20或NP-40,10mMEDTA和500mMNaCl。7.**注意事項(xiàng)**:某些化合物如100mMZnCl2、4mMAEBSF和100μMChymostatin會(huì)抑制PSP的酶活性50%以上。8.**優(yōu)化酶切效率**:建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索實(shí)驗(yàn)濃度,實(shí)際操作中,建議酶用量1:25-1:100U/μg融合蛋白。

轉(zhuǎn)座酶是一類能夠催化轉(zhuǎn)座子(一種可移動(dòng)的DNA序列)在基因組中從一個(gè)位置移動(dòng)到另一個(gè)位置的酶。轉(zhuǎn)座子可以在DNA分子上“跳躍”,在新的位置上插入自己的拷貝,而原始位置的轉(zhuǎn)座子則可能被切除或保留。轉(zhuǎn)座酶的作用是轉(zhuǎn)座過(guò)程中的關(guān)鍵因素,它們可以被分為兩類:1.**復(fù)制型轉(zhuǎn)座酶**:在復(fù)制型轉(zhuǎn)座過(guò)程中,轉(zhuǎn)座子首先被復(fù)制,然后復(fù)制的拷貝到新的基因組位置,原始的轉(zhuǎn)座子留在原位。這種機(jī)制通常涉及到“復(fù)制-粘貼”的過(guò)程。2.**剪切型轉(zhuǎn)座酶**:在剪切型轉(zhuǎn)座過(guò)程中,轉(zhuǎn)座子從原始位置被切除,然后到新的基因組位置。這涉及到“剪切-粘貼”的過(guò)程。轉(zhuǎn)座酶的活性和轉(zhuǎn)座子的移動(dòng)可以對(duì)基因組的結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生重要影響,包括:-**基因突變**:轉(zhuǎn)座子的插入可能破壞基因的正常功能,導(dǎo)致突變。-**基因組多樣性**:轉(zhuǎn)座活動(dòng)增加了基因組的多樣性,有助于物種適應(yīng)環(huán)境變化。-**基因調(diào)控**:轉(zhuǎn)座子的插入可能激起或抑制某些基因的表達(dá)。-**新基因產(chǎn)生**:在某些情況下,轉(zhuǎn)座子的移動(dòng)可以導(dǎo)致新基因的產(chǎn)生。

SpCas9-NLS的應(yīng)用范圍廣泛,可用于細(xì)胞內(nèi)的CRISPR/Cas9系統(tǒng)介導(dǎo)的基因編輯。

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在基因編輯中,除了NLS-Cas9-EGFPNuclease,還有多種技術(shù)可以提高編輯的特異性,這些技術(shù)包括:1.**高保真Cas9變體**:通過(guò)工程化改造Cas9蛋白,例如使用SpCas9-HF1或eSpCas9等高保真變體,可以減少脫靶效應(yīng),提高特異性。2.**堿基編輯器(BaseEditors)**:這類編輯器可以在不產(chǎn)生DNA雙鏈斷裂的情況下直接在特定位置進(jìn)行單個(gè)堿基的轉(zhuǎn)換,從而減少非目標(biāo)編輯。3.**引導(dǎo)編輯器(PrimeEditors)**:由哈佛大學(xué)劉如謙教授團(tuán)隊(duì)開(kāi)發(fā)的引導(dǎo)編輯器可以在不依賴DNA雙鏈斷裂和同源定向修復(fù)的情況下,實(shí)現(xiàn)精細(xì)的基因組編輯。4.**CRISPRi和CRISPRa**:這兩種技術(shù)分別用于抑制或激起特定基因的表達(dá),而不切割DNA,從而減少了脫靶風(fēng)險(xiǎn)。5.**新型CRISPR系統(tǒng)**:例如CRISPR/Cas12j和CRISPR/CasΦ,這些系統(tǒng)可能具有不同的PAM序列要求和更高的特異性。6.**AI輔助設(shè)計(jì)**:利用人工智能預(yù)測(cè)和優(yōu)化sgRNA的設(shè)計(jì),以減少脫靶效應(yīng)。7.**優(yōu)化遞送系統(tǒng)**:改進(jìn)CRISPR組分的遞送方法,例如使用核糖核的蛋白(RNP)復(fù)合物,可以提高編輯效率和特異性。8.轉(zhuǎn)座子編輯系統(tǒng):利用轉(zhuǎn)座子進(jìn)行基因組編輯,可以在不依賴DNA雙鏈斷裂的情況下實(shí)現(xiàn)大片段DNA序列的插入。

在基因編輯中,Pfu DNA Polymerase 可用于目的基因或編輯工具的克隆,減少克隆過(guò)程中的非目標(biāo)突變。Recombinant Cynomolgus IGF1R/CD221 Protein,His Tag

蛋白在表達(dá)過(guò)程中形成包涵體,需要通過(guò)復(fù)性步驟恢復(fù)其活性。這通常涉及物質(zhì)的存在下進(jìn)行蛋白質(zhì)的重折疊。Recombinant Mouse AMCase/CHIA Protein,His Tag

EndoS,即糖苷內(nèi)切酶S(Endo-S),是一種具有高度特異性的酶,它在生物化學(xué)研究中有著重要應(yīng)用,尤其是在糖蛋白和抗體藥物偶聯(lián)物(ADCs)的研究中。以下是EndoS的一些關(guān)鍵特點(diǎn):1.**特異性**:EndoS能夠特異性地識(shí)別并切割N-連接糖鏈的殼二糖結(jié)構(gòu),即在N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和天冬酰胺之間的連接處進(jìn)行切割。2.**應(yīng)用**:在制備糖鏈定點(diǎn)ADC化合物中,EndoS被用于將小分子細(xì)胞毒藥物“一步”定點(diǎn)連接到抗體糖基化位點(diǎn),提供了一種重要的技術(shù)方法。3.**兼容性**:EndoS對(duì)多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性,可以接受不同生物正交基團(tuán)、熒光基團(tuán)等衍生物作為底物,實(shí)現(xiàn)抗體糖基化修飾。4.**活性**:EndoS的活性對(duì)多肽沒(méi)有嚴(yán)格的要求,可以接受蛋白質(zhì)、肽、天門(mén)冬酰胺或游離聚糖作為底物。但是,對(duì)于具有三、四個(gè)支鏈的唾液酸化及去唾液酸化的聚糖,EndoS沒(méi)有活性。5.**產(chǎn)品形式**:EndoS通常以帶有His標(biāo)簽的形式存在,便于從反應(yīng)中去除,這在實(shí)驗(yàn)操作中提供了便利。6.**研究進(jìn)展**:EndoS在去糖基化方法研究中是一個(gè)重要的工具,特別是在研究糖蛋白的多肽部分和多糖部分的結(jié)構(gòu)和功能時(shí)。

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