SYBR Green I染料試劑：SYBR Green I染料法采用了Applied Biosystems SYBR Green I染料，一種可以在PCR循環(huán)過程中隨著PCR產(chǎn)物的累計(jì)而對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)的高度特異性雙鏈DNA結(jié)合染料。TaqMan和SYBR Green I染料法為重要的區(qū)別在于SYBR Green I染料試劑可以檢測(cè)所有雙鏈DNA，包括非特異性的反應(yīng)產(chǎn)物。因此這樣經(jīng)過特別優(yōu)化的反應(yīng)體系，對(duì)于獲取準(zhǔn)確的結(jié)果而言是非常必要的。使用SYBR Green I染料法的檢測(cè)類型SYBR Green I染料法可用于以下檢測(cè)類型：用于RNA定量的一步法RT-PCR；用于RNA定量的兩步法RT-PCR；DNA/cDNA定量。熒光檢測(cè)系統(tǒng)可接收熒光信號(hào)，每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，熒光信號(hào)累積和PCR產(chǎn)物形成是同步。佛山單通道qPCR儀型號(hào)

q225 加樣孔板側(cè)壁和金屬熱塊能夠嚴(yán)密貼合，使液體樣品迅速達(dá)到設(shè)定溫度，從而減少實(shí)驗(yàn)時(shí)間。右上為 q225 在一次40 個(gè)循環(huán)的常規(guī)qPCR 實(shí)驗(yàn)內(nèi)加熱塊溫度變化情況，在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中金屬塊升降溫迅速且溫度穩(wěn)定，不受機(jī)器本身隨實(shí)驗(yàn)時(shí)間延長(zhǎng)而內(nèi)部背景溫度上升的影響。qPCR 反應(yīng)所需時(shí)間很大程度上取決于對(duì)反應(yīng)溶液進(jìn)行變溫所需要的時(shí)間，而這一過程又受到加熱塊升降溫速度和液體升降溫速度兩方面的影響。q225 所使用的熱循環(huán)系統(tǒng)峰值變溫速率可達(dá)4°C/s，更重要的是，經(jīng)過精密設(shè)計(jì)的加熱塊能夠很大程度地貼合孔板形狀，實(shí)現(xiàn)高效的熱傳導(dǎo)，使得在加熱塊達(dá)到預(yù)定溫度后反應(yīng)溶液也能在短時(shí)間內(nèi)達(dá)到相同溫度，反應(yīng)溶液溫度更為均一。q225 出色的熱循環(huán)系統(tǒng)設(shè)計(jì)使得40 個(gè)循環(huán)的常規(guī) qPCR 可以在短短43 分鐘內(nèi)輕松完成，讓您的工作效率獲得質(zhì)的提升 。SNP基因分型SNP分型用HRM高分辨熔解曲線方法來做，速度快，效率高。在進(jìn)行大量SNP標(biāo)記分型時(shí)無需合成熒光探針和熒光引物。可以的節(jié)省實(shí)驗(yàn)成本。佛山單通道qPCR儀型號(hào)qPCR擴(kuò)增效率100%的理想條件下的PCR反應(yīng)，PCR產(chǎn)物量呈指數(shù)倍增長(zhǎng)Yn=Y0×2^n。

內(nèi)標(biāo)在傳統(tǒng)定量中的作用：由于傳統(tǒng)定量方法都是終點(diǎn)檢測(cè)，即PCR到達(dá)平臺(tái)期后進(jìn)行檢測(cè)，而PCR經(jīng)過對(duì)數(shù)期擴(kuò)增到達(dá)平臺(tái)期時(shí)，檢測(cè)重現(xiàn)性極差。同一個(gè)模板在96孔PCR儀上做96次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，所得結(jié)果有很大差異，因此無法直接從終點(diǎn)產(chǎn)物量推算出起始模板量。加入內(nèi)標(biāo)后，可部分消除終產(chǎn)物定量所造成的不準(zhǔn)確性。但即使如此，傳統(tǒng)的定量方法也都只能算作半定量、粗略定量的方法。3．內(nèi)標(biāo)對(duì)定量PCR的影響：若在待測(cè)樣品中加入已知起始拷貝數(shù)的內(nèi)標(biāo)，則PCR反應(yīng)變?yōu)殡p重PCR，雙重PCR反應(yīng)中存在兩種模板之間的干擾和競(jìng)爭(zhēng)，尤其當(dāng)兩種模板的起始拷貝數(shù)相差比較大時(shí)，這種競(jìng)爭(zhēng)會(huì)表現(xiàn)得更為***。但由于待測(cè)樣品的起始拷貝數(shù)是未知的，所以無法加入合適數(shù)量的已知模板作為內(nèi)標(biāo)。也正是這個(gè)原因，傳統(tǒng)定量方法雖然加入內(nèi)標(biāo)，但仍然只是一種半定量的方法。

1983年，美國(guó)化學(xué)家Kary Mullis發(fā)明了聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(polymerase chain reaction， PCR)，這一技術(shù)將DNA聚合酶的特性結(jié)合核酸雙鏈的變性復(fù)性特性，采用適溫延伸、高溫變性以及低溫復(fù)性，讓目的核酸片段實(shí)現(xiàn)了特異性體外擴(kuò)增，可將極微量的目標(biāo)DNA特異地?cái)U(kuò)增上百萬倍，從而提高對(duì)DNA分子的分析和檢測(cè)靈敏度。尤其是耐熱DNA聚合酶的發(fā)現(xiàn)，更是極大地促進(jìn)了PCR技術(shù)在分子生物學(xué)科研，及臨床分子診斷領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用。常用的 PCR 技術(shù)包括逆轉(zhuǎn)錄PCR（Reverse Transcription PCR，RT-PCR）和實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-time Quantitative PCR，qPCR）等。PCR的種類根據(jù)化學(xué)發(fā)光原理可以分為：SYBR染料法和TaqMan探針法。

染色質(zhì)片段化——DN段化:細(xì)胞核材料片段化是獲得良好的ChIP 分辨率的關(guān)鍵因素，理想情況下的片段大小在 200 到 800 bp對(duì)之間。剪切是難控制的步驟之一。通過超聲處理和/或核酸酶/酶促消化可以實(shí)現(xiàn)剪切，各有利弊。超聲處理需要大量的手動(dòng)操作時(shí)間，但非常適合難以裂解的細(xì)胞；酶促消化不需要手動(dòng)操作，適用于大量樣品的處理，但其剪切位點(diǎn)不是隨機(jī)的。兩種方法都需要根據(jù)具體細(xì)胞系進(jìn)行優(yōu)化。注意：此時(shí)可以停止ChIP。經(jīng)過剪切/消化染色質(zhì)后，可以將樣品于-80°C儲(chǔ)存。避免反復(fù)凍融。qpcr在擴(kuò)增每個(gè)循環(huán)中模板DNA通過變性、復(fù)性、延伸三個(gè)階段形成更多的子代DNA，為下一個(gè)循環(huán)提供模板DNA。佛山單通道qPCR儀型號(hào)

SYBR Green是一種DNA插入染料用于qPCR。雖然SYBR Green方法比探針方法便宜，但是特異性沒有熒光探針方法好。佛山單通道qPCR儀型號(hào)

免疫沉淀——捕獲并分離蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物使用抗體捕獲蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物中的目標(biāo)蛋白質(zhì)是實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵因素。抗體免疫沉淀并從細(xì)胞核組分中分離蛋白質(zhì)，去除不相關(guān)的細(xì)胞物質(zhì)。使用抗體結(jié)合磁珠完成所得抗體-蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物的純化。經(jīng)過孵育后，充分洗滌磁珠-抗體-蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物，純化并洗脫蛋白質(zhì)-DNA復(fù)合物。制備DNA——解交聯(lián)和DNA純化:現(xiàn)在含有目標(biāo)蛋白質(zhì)的染色質(zhì)片段已分離，需要解交聯(lián)并純化DNA。解交聯(lián)通常采用高熱孵育和/或消化來完成。注意：此時(shí)可以停止ChIP。經(jīng)過解交聯(lián)和/或DNA純化后，可以將樣品于-20°C儲(chǔ)存。佛山單通道qPCR儀型號(hào)

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