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重慶鼠尾膠原廠家

來源: 發(fā)布時(shí)間:2021-11-14

詳細(xì)步驟如下:1.75%酒精浸泡大鼠尾巴30min;2.將尾巴剪開、去掉皮毛,并剪成小段(3cm左右),抽出銀色的尾鍵;3.把剪碎的尾鍵置于150ml,0.1%消過毒的醋酸中,4℃放置,并不時(shí)振蕩;4.48h后取上清,4000轉(zhuǎn)離心30min后,取上清;5.分裝上清(鼠尾膠)4度(或-20度)保存。有時(shí)可繼續(xù)向4。中沉淀中加入10-20ml醋酸,重復(fù)以上步驟,以制備更多的鼠尾膠。在使用時(shí),先將冰存的膠原液在室溫下解凍,再按以下步驟包被培養(yǎng)器皿:1)用吸管吸取膠原液,在無菌的培養(yǎng)器皿的生長面內(nèi)壁上均勻地涂上薄薄的一層膠原溶液。2)若包被的是培養(yǎng)瓶,可向培養(yǎng)瓶通入氨氣或用浸有氨水的棉球封口片刻。讓氨氣充入瓶內(nèi)后,即可旋緊瓶蓋或塞緊瓶塞。若為培養(yǎng)皿或板的話,可將培養(yǎng)皿或板放在已消毒的飯盒內(nèi),將浸有氨水的棉球放入飯盒內(nèi),蓋緊飯盒蓋,四周用封口膠封死。涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實(shí)驗(yàn)的長時(shí)程記錄,并且制作簡便,成本低廉。重慶鼠尾膠原廠家

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鼠尾膠原蛋白的提取方法:1.將黏稠的膠體溶液進(jìn)行高速冷凍離心處理,收集上清液;在冰水浴中,用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,4°C沉淀10小時(shí),去除上清液,絮狀溶液高速冷凍離心處理,收集沉淀2.用0.03?0.06mol/L的檸檬酸溶液溶解沉淀物,成透明澄清黏稠溶液;在冰水浴中,調(diào)節(jié)pH = 6.5,用的3?6mol/L的NaCl溶液緩慢加入上清液中,不斷攪拌至溶液中白色的絮狀物不再析出,4°C沉淀10小時(shí),去除上清液,去除上清液,絮狀溶液高速冷凍離心處理,收集沉淀。合肥北京鼠尾膠原鼠尾型膠原構(gòu)建與人類自體骨組織化學(xué)成分和分子結(jié)構(gòu)相近的仿生骨材料。

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使用方法:1、細(xì)胞培養(yǎng)器皿的表面包被:以包被濃度為2μg/cm2為例,用無菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL。加到相應(yīng)的培養(yǎng)器皿中,確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面。開蓋在超凈臺(tái)上過夜晾干,也可以在室溫放置1小時(shí)后,用PBS洗3~4次后直接使用。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個(gè)月以上的時(shí)間。2、三維膠原凝膠的制備:A、無細(xì)胞三維膠原凝膠的制備(以配制1mg/mL三維膠1mL為例)將200μL本品加到置于冰浴的離心管中,加入690μL雙蒸水,然后加到12μL0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)),立即混勻。再加入100μL10×PBS或10×培養(yǎng)液,混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養(yǎng)液中沒有加酚紅,初次使用時(shí)需要測定pH值)。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后,轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10×PBS,使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。

鼠尾膠原簡介:鼠尾I型膠原蛋白(Collagenfromrattail,TypeI)系采用Birkedal-Hansen方法在無菌下制備,純度達(dá)到95%以上,可溶于0.006mol/L乙酸。本品可用于細(xì)胞培養(yǎng)皿的包被,特別適合普通細(xì)胞培養(yǎng)器皿不易貼壁細(xì)胞的培養(yǎng);也可用于制備三維膠原凝膠,使細(xì)胞在模擬的三維環(huán)境中生長。質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):1、SDS-PAGE分析純度大于95%。2、無菌檢驗(yàn)結(jié)果為陰性。3、本品2μg/cm2包被細(xì)胞培養(yǎng)皿后培養(yǎng)PC-12細(xì)胞,貼壁及生長正常。4、本品濃度1mg/mL,pH7.0時(shí)形成具有一定強(qiáng)度的三維膠原凝膠,NIH-3T3細(xì)胞在三維凝膠內(nèi)生長正常、PC-12細(xì)胞在三維凝膠表面生長正常。制備鼠尾膠原:吸去生理鹽水,將尾腱稱重(0.5-1克)。

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膠原蛋白的功效與作用:一提起膠原蛋白,女性朋友們眼睛都放光了,因?yàn)槲覀兌贾滥z原蛋白被稱為我們皮膚的“軟黃金”,層中70%都是膠原蛋白,膠原蛋白含量的多少?zèng)Q定克皮膚的年輕程度!是讓我們皮膚變得有彈性的東西。大部分只知道需要補(bǔ)充膠原蛋白,但是卻不知道什么時(shí)候需要補(bǔ)充膠原蛋白,總認(rèn)為自己還年輕不需要補(bǔ)充,其實(shí)這是錯(cuò)誤的觀念,膠原蛋白在女性20歲的時(shí)候就已經(jīng)開始流失了,含量逐漸下降,25歲后進(jìn)入流失的高峰期,40歲時(shí)的含量不到80歲的一半,所以我們應(yīng)該20歲就開始補(bǔ)充膠原蛋白,以保持皮膚的年輕狀態(tài)。一種基于鼠尾膠原蛋白:各材料重量配比為鼠尾膠原蛋白聚乙烯醇?xì)ぞ厶菫?% 2% 1%,余量的水。重慶鼠尾膠原廠家

它是研究成纖維細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)之間以及細(xì)胞之間相互作用的良好模型。重慶鼠尾膠原廠家

鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基,它具有促進(jìn)體外培養(yǎng)細(xì)胞(特別是上皮細(xì)胞)貼壁的作用,同時(shí)它也是一種天然的黏附劑,當(dāng)我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)放置小玻片,制備細(xì)胞爬 片時(shí),可在瓶底涂一層膠原,再放上小玻片,自然干燥后小玻片就固定于培養(yǎng)瓶之中。通 過本實(shí)驗(yàn)可掌握鼠尾膠原的制備方法,以及如何切割小玻片,并利用鼠尾膠原將其固定于 培養(yǎng)瓶內(nèi)。 實(shí)驗(yàn)設(shè)備及材料: 大鼠尾巴、剪刀、鑷子、止血鉗、彎頭吸管、平皿、三角燒瓶、燒杯、量筒、天平、生理 鹽水、75%酒精、0.1%醋酸溶液、蓋玻片、培養(yǎng)瓶、鉆石筆、鼠尾膠原。 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容: 1、制備鼠尾膠原。 2、切割小玻片。 3、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養(yǎng)瓶內(nèi)。重慶鼠尾膠原廠家

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與鼠尾膠原相關(guān)的擴(kuò)展資料:

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鼠尾膠原是一種天然培養(yǎng)基,它具有促進(jìn)體外培養(yǎng)細(xì)胞(特別是上皮細(xì)胞)貼壁的作用,同時(shí)它也是一種天然的黏附劑,當(dāng)我們需要在培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿內(nèi)放置小玻片,制備細(xì)胞爬片時(shí),可在瓶底涂一層膠原,再放上小玻片,自然干燥后小玻片就固定于培養(yǎng)瓶之中。
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