細胞凍存:細胞培養的傳代及日常維持過程中,在培養器具、培養液及各種準備工作方面都需大量的耗費,而且細胞一旦離開活的開始原代培養,它的各種生物特性都將逐漸發生變化并隨著傳代次數的增加和體外環境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進行細胞凍存十分必要。細胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;細胞儲存在液氮中,溫度達-196℃,理論上儲存時間是無限的。原理:細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融,實驗證明這樣可以較大限度的保存細胞活力。如今細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑,這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性,加上緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外,減少細胞內冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應采用快速融化的方法,這樣可以保證細胞外結晶在很短的時間內即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。無血清細胞凍存液產品性能:既適用于一般培養細胞的凍存,也適用于無血清培養細胞和蛋白表達細胞的凍存。珠海正規無血清細胞凍存液廠家推薦
復蘇方:法1)從冰箱里取出細胞冷凍保存管,立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍。2)待凍存管中細胞混合液完全融化后,立即加入1ml細胞培養基于該冷凍管中與細胞混合,再將細胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細胞培養基的試管中,混合均勻。3)離心收集培養細胞(參考離心條件:1,000~2,000rpm,4℃,3~5min),移去上清液。4)清洗細胞,充分洗凈殘留凍存液。5)加入適量的新鮮細胞培養基,使用移液管緩緩地均勻細胞混合液。適量地稀釋后,將細胞混合液移至事先準備好的培養瓶中。6)鏡檢后,研究者可根據各自方法和需要來進行細胞培養。南昌無血清細胞凍存液單價無血清凍存液特性:不含動物成分。
細胞凍存的基本原理:細胞代謝過程需要各種蛋白酶的參與,而這些蛋白酶在環境溫度低于-70℃時會集體不工作,低溫貯藏的目的是通過較低溫使細胞代謝活動近乎停止。細胞因此進入休眠狀態,使細胞“不會老”,所以可以長期保存。因為凍融過程對所有細胞和組織都是有一定傷害的,因此,需要開發出有效的技術來防止細胞死亡和損傷。低溫保護劑可保護細胞不受細胞內冰凍影響,目前多采用DMSO,甘油,乙二醇和丙二醇等滲透型低溫保護劑。它們的作用機制包括:自由進入細胞,取代水,使冰點下降,充當鹽的二次溶劑,提高細胞膜對水的通透性。
無血清細胞凍存液,含多種保護劑成分。一些保護劑,易于穿透細胞,避免細胞內部水分子形成冰晶損傷細胞,同時另一些保護劑不能穿透細胞,但可以在冰晶形成之前,優先結合細胞外的水分子,降低細胞外溶液的電解質濃度,減少陽離子進入細胞的數量,為多種保護劑組合,在細胞內外進行雙重保護,較大提高了細胞復蘇存活率。無血清細胞凍存液不含牛血清,無動物源組份。2-8℃即可穩定保存,無需冷凍,即取即用。凍存細胞,無需程序降溫。凍存細胞復蘇率在90%以上。即用型產品,4℃可穩定保存。
細胞凍存的注意事項:1.為保持細胞較大存活率,一般都采用慢凍存融的方法。2.凍存物距液氮面越近溫度越低。標準的低凍速度為-1℃~12℃/分鐘,當溫度下降達-25℃時,下降速度可增至-5~-10℃/分鐘,到-100℃時則可迅速凍入液氮中。因此要適當掌握凍存物下降入液氮中的速度,過快能影響細胞內水分透出,太慢則促冰晶形成。3.初次凍存者在下降凍存時,宜先用細木棒伸入罐中探測液面位置,然后需用溫度計與凍存物并行的辦法,以觀測下降凍存物的速度、凍存物與液氮液面距離和溫度三者關系,當已掌握以上各參數和凍存技術熟練后,光按下降時間和下降距離便可獲理想凍存效果無血清細胞凍存液產品特色:不含動物源成分,病毒、霉菌和支原體等污染可能性低。蕪湖南昌無血清細胞凍存液
無血清細胞凍存液存儲條件:儲存于4℃以下,質量保障期從產品的生產日期起,為期兩年。珠海正規無血清細胞凍存液廠家推薦
細胞凍存秘籍:細胞凍存對于大多數動物細胞,通常每分鐘下降-1至-3℃。控制冷卻過程的較好方法是使用程序降溫系統。如果沒有程序降溫系統,可以使用程序降溫盒,然后將其置于-70℃至-90℃冰箱中過夜。雖然這種方法適用于許多細胞系,但不能提供可控的,均勻的或可重復的冷卻,不建議用于珍貴細胞。無論使用哪種冷卻方法,重要的是快速高效地將其傳輸到較終存儲位置。如果轉移不能立即完成,可以將小瓶置于干冰上一段時間。這樣可以避免在轉移過程中發生溫度升高而損害細胞。在這個轉移過程中溫度升高是解凍后影響細胞活力的主要原因。珠海正規無血清細胞凍存液廠家推薦