細胞凍存注意事項：離心問題：目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)，第二天換液。因為離心的目的是兩個，去除DMSO，去除死細胞，這個是標準流程，但對一般人來說，把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間，轉(zhuǎn)的不夠活細胞沉底的少，細胞就全被扔掉了，轉(zhuǎn)過了活細胞會受壓過大，死亡。此外在操作過程中容易污染，所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜（DMSO），DMSO對細胞有一定的毒副作用，所以須將離心后的液體前倒凈，且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復蘇，結(jié)果無有異常。需液氮凍存，且不能原位（如孔板）凍存。開封無血清細胞凍存液廠家批發(fā)價

細胞凍存：細胞培養(yǎng)的傳代及日常維持過程中，在培養(yǎng)器具、培養(yǎng)液及各種準備工作方面都需大量的耗費，而且細胞一旦離開活的開始原代培養(yǎng)，它的各種生物特性都將逐漸發(fā)生變化并隨著傳代次數(shù)的增加和體外環(huán)境條件的變化而不斷有新的變化。因此及時進行細胞凍存十分必要。細胞冷凍儲存在-70℃冰箱中可以保存一年之久；細胞儲存在液氮中，溫度達-196℃，理論上儲存時間是無限的。原理：細胞凍存及復蘇的基本原則是慢凍快融，實驗證明這樣可以較大限度的保存細胞活力。如今細胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護劑，這兩種物質(zhì)能提高細胞膜對水的通透性，加上緩慢冷凍可使細胞內(nèi)的水分滲出細胞外，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少由于冰晶形成造成的細胞損傷。復蘇細胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)即融化，避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對細胞造成損傷。溫州重慶無血清細胞凍存液無血清細胞凍存液的優(yōu)勢：無血清細胞凍存液是不含血清和動物源成分。

無血清細胞凍存液與含血清細胞凍存液對比：傳統(tǒng)的細胞凍存液是使用培養(yǎng)基、血清和DMSO按照一定的比例混合，其中DMSO的含量是10%，血清的含量是10%，統(tǒng)稱為含血清細胞凍存液。含血清細胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法，如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘，然后移至-20℃冰箱30分鐘，再移至-80℃冰箱保存16-18個小時（或隔夜），較后才移至液氮罐中進行長期的儲存。可見，含血清細胞凍存液凍存細胞時遇到的問題：1.凍存細胞時需現(xiàn)配凍存液(如購買市面上通用的含血清細胞凍存液，此步可省略)。2.需要程序降溫（4℃→-20℃→-80℃→液氮），步驟繁瑣，耗時耗力。3.含血清，細胞污染(病毒、霉菌和支原體等)的風險更高。4.血清批次、品質(zhì)間差異導致凍存液的批次間差異。5.需液氮凍存，且不能原位（如孔板）凍存。

細胞凍存注意事項：1、細胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml－15m培養(yǎng)液，而在我的試驗中的經(jīng)驗總結(jié)為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。2、復蘇細胞分裝的問題：試驗中我的經(jīng)驗總結(jié)為復蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中，分裝過多，細胞濃度過低，不利于細胞的貼壁。3、加培養(yǎng)基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題是DMSO的濃度，從如果你加培養(yǎng)基的太少，那么DMSO的濃度就會比較大，就會影響細胞生長，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小于0.5%的時候?qū)σ话慵毎麤]有什么影響，還有一個說法是1％。所以如果你的凍存液的濃度是10％DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度無血清快速細胞凍存液：含動物來源的血清成分，能夠有效提高細胞凍存活率和復蘇活力。

細胞凍存概念：細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。細胞凍存和復蘇的原則是：慢凍速融，這樣更加有利于保持細胞的活力。凍存細胞不加任何保護劑，會導致細胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生，從而使細胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機械損傷，引起細胞內(nèi)環(huán)境滲透壓，PH，電解質(zhì)等的改變，進而促使細胞死亡。無血清細胞凍存液的優(yōu)勢：無需程序降溫，可直接放置-80℃凍存，操作簡單。金華無血清細胞凍存液服務(wù)電話

無血清細胞凍存液用于其他類型哺乳動物細胞的儲存。開封無血清細胞凍存液廠家批發(fā)價

無血清快速細胞凍存液凍存細胞復蘇方法：1、從冰箱里取出細胞冷凍保存管，立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍。2、待凍存管中細胞混合液完全融化后，立即加入1ml細胞培養(yǎng)基于該冷凍管中與細胞混合，再將細胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細胞培養(yǎng)基的試管中，混合均勻。3、離心收集培養(yǎng)細胞（參考離心條件：1,000~2,000rpm，4℃，3~5min），移去上清液。4、清洗細胞，充分洗凈殘留凍存液。5、加入適量的新鮮細胞培養(yǎng)基，使用移液管緩緩地均勻細胞混合液。適量地稀釋后，將細胞混合液移至事先準備好的培養(yǎng)瓶中。6、鏡檢后，研究者可根據(jù)各自方法和需要來進行細胞培養(yǎng)。開封無血清細胞凍存液廠家批發(fā)價