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福建DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基廠家

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-07-11

    可在血清含量低時(shí)用,適用于克隆化培養(yǎng)。F12適用于CHO細(xì)胞,也是無血清細(xì)胞培養(yǎng)基中常用的基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基。DMEM/F12細(xì)胞培養(yǎng)基將DMEM和F12按照1:1比例混合,混合后營養(yǎng)成份豐富,血清使用量也減少。常作為開發(fā)無血清細(xì)胞培養(yǎng)基時(shí)的基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基。與天然培養(yǎng)基相比,有些天然的未知成分尚無法用已知的化學(xué)成分所替代,因此,細(xì)胞培養(yǎng)中使用合成培養(yǎng)基時(shí)必須加入一定量的天然培養(yǎng)基成分,以克服合成培養(yǎng)基的不足。普遍的做法是添加5~10%的血清,這樣才能維持細(xì)胞活力,促進(jìn)細(xì)胞增殖。針對不同的動(dòng)物細(xì)胞,現(xiàn)已開發(fā)了多種商業(yè)化、個(gè)性化的低血清細(xì)胞培養(yǎng)基配方,營養(yǎng)成份更加豐富,血清使用量可降低至1~3%,由此可減少了血清等動(dòng)物來源成份對生物制品安全性的影響。無血清細(xì)胞培養(yǎng)基(serumfreemedium,SFM)經(jīng)歷了天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基后,無血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)成為當(dāng)今細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一大趨勢。采用無血清培養(yǎng)可降低生產(chǎn)成本,簡化分離純化步驟,避免病毒污染造成的危害。無血清培養(yǎng)基,一般是在合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,加入成份完全明確的或部分明確的血清替代成份,達(dá)到既能滿足動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的要求,又能有效克服使用血清所帶來問題的目的。Fischer’s培養(yǎng)基是Glen Fischer在美國國家ai癥研究所設(shè)計(jì)的,初用于小鼠白血病細(xì)胞的培養(yǎng)。福建DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基廠家

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    III)細(xì)胞系的大規(guī)模連續(xù)培養(yǎng)。該培養(yǎng)基主要用于培養(yǎng)和維護(hù)鱗翅類衍生細(xì)胞系和擴(kuò)增這些細(xì)胞系的病毒。IPL-41培養(yǎng)基基礎(chǔ)也以用于無血清夜蛾細(xì)胞的桿狀病毒重組蛋白表達(dá)。(balancedsaltsolution,BSS)BSS主要是由無機(jī)鹽、葡萄糖組成,它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡,保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。其主要用于細(xì)胞的漂洗、配制其他試劑等。目前用于細(xì)胞培養(yǎng)的血清主要是牛血清,培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也用人血清、馬血清等。牛血清對絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞都是適合的,但并不排除在培養(yǎng)某種細(xì)胞時(shí)使用其他動(dòng)物血清更合適。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、無機(jī)物等,這些物質(zhì)對促進(jìn)細(xì)胞生長或抑制生長活性是達(dá)到生理平衡的。合成培養(yǎng)基是根據(jù)天然培養(yǎng)基的成分,用化學(xué)物質(zhì)模擬合成、人工設(shè)計(jì)、配制的培養(yǎng)基。福建DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基廠家Leibovitz’s L-15培養(yǎng)基的緩沖系統(tǒng)由磷酸鹽和游離堿基氨基酸組成,代替了傳統(tǒng)的碳酸氫鈉緩沖系統(tǒng)。

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    L-谷氨酰胺(Glutamine)是細(xì)胞培養(yǎng)中所必需的一種營養(yǎng)素,但其在溶液中不穩(wěn)定,會(huì)自發(fā)降解生成氨和焦谷氨酸,其中氨對細(xì)胞有害;而L-丙氨酰-L-谷氨酰胺在水溶液中十分的穩(wěn)定,不會(huì)自發(fā)的降解。細(xì)胞利用其機(jī)制是:在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí),細(xì)胞會(huì)逐漸向培養(yǎng)液中釋放一種肽酶,將L-丙氨酰-L-谷氨酰水解成L-丙氨酸和L-谷氨酰胺,而后細(xì)胞會(huì)將這兩種水解產(chǎn)物吸收利用。細(xì)胞利用L-丙氨酰-L-谷氨酰的過程與流加培養(yǎng)策略相似,連續(xù)的將低濃度水平的L-谷氨酰胺加入到培養(yǎng)液中,從而提高了L-谷氨酰胺的利用率,且不會(huì)生成多余的氨,更利于細(xì)胞的生長。L-丙氨酰-L-谷氨酰可以代替等摩爾的L-谷氨酰胺,適用于所有的細(xì)胞,幾乎無需適應(yīng),并且可以延長細(xì)胞的培養(yǎng)時(shí)間,減少傳代次數(shù),即節(jié)省了時(shí)間也節(jié)約了金錢。與添加L-谷氨酰胺的培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)胞相比,活性降低得更慢。延滯期略微延長的原因是肽酶的釋放和二肽的消化需要一定的時(shí)間。NEAA(非必須氨基酸),是在MEM培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上添加L-丙氨酸、L-谷氨酸、L-天(門)冬酰胺、L-天(門)冬氨酸、L-脯氨酸、L-絲氨酸和甘氨酸7種NEAA,能降低細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)細(xì)胞自身生產(chǎn)非必須氨基酸的副作用,有效促進(jìn)細(xì)胞增殖代謝。葡萄糖可以根據(jù)研究需要。

    1.細(xì)胞培養(yǎng)基的種類按照細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史,細(xì)胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基、限定化學(xué)成分細(xì)胞培養(yǎng)基等幾大種類。(balancedsaltsolution,BSS)BSS主要是由無機(jī)鹽、葡萄糖組成,它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡,保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。其主要用于細(xì)胞的漂洗、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下(表1-1)。D-Hank's與Hank's的一個(gè)主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+,因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因?yàn)镃a2+、Mg2+是細(xì)胞膜的重要組成成份,參與細(xì)胞粘附等功能,使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細(xì)胞結(jié)團(tuán)。此外,Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液,前者緩沖能力較弱,適合于密閉培養(yǎng);后者緩沖能力較強(qiáng),適合于5%CO2的培養(yǎng)條件。天然培養(yǎng)基指來自動(dòng)物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基,如血漿、血清、雞胚浸出液等。其優(yōu)點(diǎn)是營養(yǎng)成分豐富,培養(yǎng)效果良好,但缺點(diǎn)是成分復(fù)雜,來源受限且制作過程復(fù)雜、批間差異大。目前使用的天然培養(yǎng)基是血清,另外各種組織提取液、促進(jìn)細(xì)胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也是必不可少。水解乳蛋白是乳白蛋白經(jīng)蛋白酶和肽酶水解的產(chǎn)物。RPMI RPMI 1640 培養(yǎng)基相比其他培養(yǎng)基之所以具有獨(dú)特的效果,是因?yàn)槠渲泻羞€原劑谷胱甘肽和高濃度的維生素。

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    Grace’s昆蟲培養(yǎng)基是由Grace改良的Wyatt培養(yǎng)基,該培養(yǎng)基與昆蟲血淋巴的化學(xué)成分更為相近,Grace使用這種培養(yǎng)基成功建立了***個(gè)昆蟲連續(xù)細(xì)胞系。Grace’s昆蟲培養(yǎng)基**初用于澳大利亞白星橙天蠶蛾(Anthereaeucalypti)細(xì)胞的培養(yǎng),適當(dāng)補(bǔ)充添加劑后,Grace’s昆蟲培養(yǎng)基可用于培養(yǎng)各種昆蟲細(xì)胞,包括多種鱗翅類以及一些雙翅類昆蟲的細(xì)胞。本產(chǎn)品含有多類細(xì)胞培養(yǎng)所需的氨基酸、維生素、無機(jī)鹽等多種成分,但不含蛋白質(zhì)、脂類或任何生長因子,故此產(chǎn)品需搭配血清或無血清添加物使用。Grace’s補(bǔ)充昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)基**初設(shè)計(jì)用于澳大利亞白星橙天蠶蛾(Anthereaeucalypti)的細(xì)胞生長。Grace’s補(bǔ)充昆蟲培養(yǎng)基目前***用于草地貪夜蛾細(xì)胞Sf9和Sf21的生長。Sf9和Sf21細(xì)胞常規(guī)使用于桿狀病毒表達(dá)載體系統(tǒng)(BEVS)表達(dá)重組蛋白。本產(chǎn)品含有水解乳蛋白、酵母粉、L-谷氨酰胺和碳酸氫鈉。Grace’s補(bǔ)充昆蟲培養(yǎng)基含有Grace’s昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)基(PM152011)中不常見的水解乳蛋白和酵母粉,此產(chǎn)品需搭配血清或無血清添加物使用。 McCoy’s 5A常用于多種類型的原代細(xì)胞的培養(yǎng),如骨髓、皮膚、牙齦、腎、脾、肺、大鼠胚胎、網(wǎng)膜等。福建細(xì)胞培養(yǎng)基檢測

Fischer’s培養(yǎng)基主要用于造血細(xì)胞的培養(yǎng),如淋巴母細(xì)胞和淋巴細(xì)胞的培養(yǎng)。福建DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基廠家

    青霉素-鏈霉素混合液通常也被稱為“雙抗”,是體外培養(yǎng)中為預(yù)防微生物污染**常用的***,其中,青霉素能夠干擾細(xì)菌細(xì)胞壁的合成,對革蘭陽性菌特別有效;而鏈霉素能夠與細(xì)菌核糖體30S亞單位結(jié)合,抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成,對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌均有效,但對革蘭氏陰性菌特別有效。青霉素和鏈霉素聯(lián)合使用可以預(yù)防絕大部分的細(xì)菌污染。本產(chǎn)品含有多類細(xì)胞培養(yǎng)所需的氨基酸、維生素、無機(jī)鹽等多種成分,但不含蛋白質(zhì)、脂類或任何生長因子,故此產(chǎn)品需搭配血清或無血清添加物使用。注意事項(xiàng)本產(chǎn)品經(jīng)過濾除菌,使用時(shí)應(yīng)注意無菌操作,避免污染;為保持本產(chǎn)品的**佳使用效果,請勿進(jìn)行凍融處理;本產(chǎn)品*用于科研或進(jìn)一步研究使用,不用于診斷和***。福建DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基廠家

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