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細胞上清外泌體提取試劑盒原理

來源: 發布時間:2023-09-11

外泌體運輸的基因類藥物也可以是miRNA,miRNA是一類非編碼的內源性RNA,主要用于調節轉錄后的基因表達。miRNA主要通過與mRNA的未翻譯的區域(UTRs)結合起到抑制基因表達和降解mRNA的作用。與siRNA不同,miRNA抑制mRNA的表達不需要完美的堿基配對,因此每種miRNA可以抑制多種蛋白質的表達,而每種siRNA只針對一種蛋白質。miRNA的運載也存在著種種挑戰:miRNA體內穩定性差、生物分布不理想、易被體內酶降解以及容易引起副反應等。越來越多的研究表明外泌體也是體內運載miRNA的優良載體,并且利用外泌體運輸miRNA的zhiliao方法已經在許多疾病模型中得以應用。外泌體被包裹在堅硬的雙層膜中,雙層膜保護外泌體的內容物,使外泌體能夠在組織中長距離移動。細胞上清外泌體提取試劑盒原理

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在運輸DOX的研究中,Wei等選擇了已經在臨床上使用的未成熟的樹突細胞作為母代細胞,通過化學轉染使其分泌的外泌體表面含有Lamp2b,這種蛋白可以與αv整合蛋白特異性iRGD肽結合,使外泌體對DOX的運輸具有靶向性。將對iRGD肽靶向的外泌體和未經靶向性處理的外泌體用DiR染料標記,并分別靜脈注射入移植了人乳腺ai細胞的小鼠體內,觀察到靶向的外泌體在注射30min后已經出現在中流組織處,在注射2h后外泌體的含量高,而未經靶向性處理的外泌體在注射后主要集中在肝臟,幾乎很少到達中流組織處,說明對iRGD肽靶向的外泌體具有很好的靶向性。細胞上清外泌體提取試劑盒原理外泌體其純度與超離心法和PEG沉淀法提取外泌體做比較。

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膜封閉的囊泡釋放到周圍環境中已經成為近幾年來越來越受關注的問題。令人信服的證據表明囊泡可交換復雜的信息有助于這種興趣的興起。但是,也已經清楚,不同類型的分泌囊泡共存,具有不同的細胞內起源和形成模式,因此可能具有不同的組成和功能。外泌體是分泌囊泡的一種亞型。它們在真核細胞內的多泡小體中形成,并且當這些多泡小體與質膜融合時分泌到細胞外。有趣的是,不同的分子家族已被證明參與細胞內形成外泌體及其隨后的分泌,這表明即使在外泌體中也存在不同的亞型。

各種細胞粘著分子在外泌體膜表面表達,由其決定外泌體被運輸往哪一種細胞,期望開發利用該特征的新型DDS。外泌體在體液中十分穩定,同時外囊泡所含的蛋白質和RNA被外泌體的脂質雙層膜所包被也不會分解。另外在從體液中提取外泌體后,體液可長期穩定保存,因此外泌體有望成為臨床檢測的新型疾病生物標記。外泌體與各種疾病的相關性被檢測出,特別是血液中釋放的病細胞來源的外泌體,其與正常細胞來源外泌體在結構分子上的差異倍受矚目,并作為癥狀早期診斷技術,應用于與癥狀進展相關的研究。甚至人們期望將尿液中的外泌體作為腎臟、前列腺疾病、膀胱疾病的新型診斷標記,髓液中的外泌體作為腦內種瘤和神經退行性疾病的新型標記物。實際上,用PS親和法提取的人白血病細胞釋放的外泌體。

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外泌體調控毛發根部的囊干細胞的機能,延長毛發根部的囊生長期,同時活化處于靜止期的毛發根部的囊,使其提前進入新的生長周期,實現了毛發的再次生長。骨衰老小鼠注射外泌體試驗證明:年輕血液中的外泌體同樣使衰老的組織重新煥發生機。來源于脂肪組織中的干細胞分泌一些信號分子和生長因子,可以促使控制毛發根部的囊生長周期的毛發根部的囊干細胞進行分化,向上遷移生成表皮細胞和皮脂腺,向下遷移生成毛母細胞。毛發根部的囊的生長周期決定毛發的生長周期,而毛發根部的囊干細胞的機能決定了毛發根部的囊的活躍程度,外泌體靶向調控毛發根部的囊干細胞的功能。近些年關于外泌體研究很普遍。安徽外泌體miRNA芯片

類風濕關節炎患者的滑膜成纖維細胞所釋放的外泌體。細胞上清外泌體提取試劑盒原理

密度梯度離心是基于差速超高速離心的改良技術。該方法需預先利用常用的梯度液介質如蔗糖、碘克沙醇和氯化銫等,在離心管中構筑從底部到頂部密度逐漸降低的密度梯度帶。根據密度梯度構建和沉降方式的不同,又可以分為速率區帶離心法和等密度梯度離心法,前者主要根據顆粒的沉降速率分離,介質密度均小于外泌體密度,離心時樣品在向超速離心管底部移動時,會通過密度不斷增加的密度梯度區帶,密度大的顆粒更容易穿過密度更高的梯度層,更快地到達管底,因此控制離心的時間很重要;等密度梯度離心法中的密度梯度區帶,則會根據樣品液中各種溶質成分來進行組合,離心過程中,無論離心時間多久,不同密度顆粒jin會富集到具有相同密度的梯度區帶,而不會沉淀到底部。細胞上清外泌體提取試劑盒原理

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