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人精漿外泌體鑒定

來源: 發布時間:2023-07-17

密度梯度離心是基于差速超高速離心的改良技術。該方法需預先利用常用的梯度液介質如蔗糖、碘克沙醇和氯化銫等,在離心管中構筑從底部到頂部密度逐漸降低的密度梯度帶。根據密度梯度構建和沉降方式的不同,又可以分為速率區帶離心法和等密度梯度離心法,前者主要根據顆粒的沉降速率分離,介質密度均小于外泌體密度,離心時樣品在向超速離心管底部移動時,會通過密度不斷增加的密度梯度區帶,密度大的顆粒更容易穿過密度更高的梯度層,更快地到達管底,因此控制離心的時間很重要;等密度梯度離心法中的密度梯度區帶,則會根據樣品液中各種溶質成分來進行組合,離心過程中,無論離心時間多久,不同密度顆粒jin會富集到具有相同密度的梯度區帶,而不會沉淀到底部。外泌體能夠影響級聯反應的每一步,因此可作為病灶治理的靶點。人精漿外泌體鑒定

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外泌體(Exosome),是細胞外囊泡(EV)的一種主要類型,是直徑為30至150nm的納米大小的膜結構,大多數細胞都會分泌外泌體。外泌體存在于各種生物體液中,通過其攜帶的蛋白質、核酸、脂質和代謝物等來發揮細胞間通訊功能,參與免疫應答、代謝和心血管疾病、神經退行性疾病以及病癥進展等多種生理和病理過程。在內體轉變為成熟多囊泡內體(MVE)的過程中,內體膜向腔內出芽形成腔內囊泡(ILV),MVE與細胞膜融合釋放ILV到細胞外,即形成外泌體。河南外泌體iTRAQ外泌體在體液中十分穩定,同時外囊泡所含的蛋白質和RNA被外泌體的脂質雙層膜所包被也不會分解。

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在Rameshwar等的研究中,采用轉染間充質干細胞的方法,使外泌體載有anti-miR-9。在進行間充質細胞和多形性成角質細胞瘤(GBM)細胞間anti-miR-9傳遞的實驗時,發現兩種細胞不僅可以通過縫隙連接介導的細胞間通訊(GJIC)也可以通過外泌體傳遞anti-miR-9。且anti-miR-9降低兩種GBM細胞(U87和T98G)對中流藥物替莫唑胺(TMZ)的抵抗能力的功能主要由外泌體傳遞的anti-miR-9實現,而非經GJIC傳遞的anti-miR-9,顯示出外泌體在運載miRNA進行基因zhiliao時的潛力。利用外泌體進行GBM的zhiliao不只停留在體外細胞實驗上,也已經有相關的體內zhiliao報道。

外泌體大小不均可能是由于MVB的限制膜不均勻內陷,導致流體和固體的總含量不同;細胞的微環境和固有的生物學特性可能會影響外顯體的含量及其生物學標記,如乳腺病細胞及其外泌體的蛋白質組可以顯示來源細胞是上皮樣細胞還是間充質樣細胞;由于細胞表面受體表達的不同,外泌體對受體細胞的影響可能不同,可能誘導細胞存活,也可能誘導凋亡,或誘導免疫調節等;異質性也可以基于外泌體起源的組織,包括它們是否來自病細胞,瘤細胞產生的外泌體傳遞致瘤miRNAs明顯促進瘤細胞增殖。外泌體分析會引起何種生理作用,這是進一步研究的發展方向。

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所有真核細胞類型包括造血細胞、上皮細胞、神經細胞、干細胞、脂肪細胞和病癥細胞均可在培養條件下分泌外泌體。體內所有體液,包括血液、唾液、腦脊液、腹水,甚至尿液中都可以分離得到外泌體。這些外泌體傳輸多種信號分子,包括蛋白質、信使核糖核酸(mRNA)和非編碼核糖核酸(RNA),其攜帶的分子可以被其他細胞吸收。因此,外泌體可以將生物信息轉移到相鄰細胞。這種細胞間通信不只涉及生理功能,還涉及一些疾病的發病機理,包括瘤、心血管疾病和神經退行性疾病等。在免疫系統中,據報道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細胞之間轉移是細胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機制。組織外泌體提取試劑盒分類

外泌體可以直接進入受體細胞影響細胞功能。人精漿外泌體鑒定

獲得囊泡粒徑分布的兩種方法動態光散射(DLS)和納米顆粒跟蹤分析(NTA)都被廣fan應用于外泌體顆粒數目和粒徑分布的測量,但兩種方法也各有不足。動態光散射法中散射光強度依賴于顆粒質量(體積),混合體系中大囊泡的存在(即使只有很少的量)將嚴重影響測量結果,因此動態光散射法更適用于單分散體系。而且動態光散射法所得的結果強烈依賴于所應用的數學算法。而采用納米顆粒跟蹤分析儀對不同粒徑范圍的囊泡進行檢測時,為了得到準確的濃度和粒徑信息,需要根據所要測量的顆粒粒徑范圍對儀器分別校準,操作繁瑣。受檢測靈敏度所限,納米顆粒跟蹤分析儀適用于粒徑范圍50nm~1μm的顆粒,粒徑小于50nm的外泌體無法檢測。除此之外,兩種方法都依賴光散射和粒子的布朗運動進行分析,難以區分合成的納米材料、大蛋白質聚合體和生物囊泡。人精漿外泌體鑒定

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