密度梯度離心是基于差速超高速離心的改良技術。該方法需預先利用常用的梯度液介質如蔗糖、碘克沙醇和氯化銫等，在離心管中構筑從底部到頂部密度逐漸降低的密度梯度帶。根據密度梯度構建和沉降方式的不同,又可以分為速率區帶離心法和等密度梯度離心法,前者主要根據顆粒的沉降速率分離,介質密度均小于外泌體密度,離心時樣品在向超速離心管底部移動時,會通過密度不斷增加的密度梯度區帶,密度大的顆粒更容易穿過密度更高的梯度層,更快地到達管底,因此控制離心的時間很重要;等密度梯度離心法中的密度梯度區帶,則會根據樣品液中各種溶質成分來進行組合,離心過程中,無論離心時間多久,不同密度顆粒jin會富集到具有相同密度的梯度區帶,而不會沉淀到底部。外泌體其純度與超離心法和PEG沉淀法提取外泌體做比較。外泌體定量

外泌體可以調控星狀細胞（HSC）活化，并參與HSC細胞遷移的進程。活化的HSC來源的外泌體中，CCN2表達升高，Twist1和miR-214表達被抑制，這些外泌體還能誘導靜止的HSC細胞表達CCN2。此外，Twist1可以誘導miR-214表達從而抑制CCN2的表達。CCL4處理的外泌體和外泌體SK1/S1P會誘導HSC遷移。MSC分泌的外泌體可以有效減緩肝纖維化過程，這可能成為肝纖維化治理的靶點。研究顯示，CP-MSC來源的外泌體miR-125b可以抑制Hedgehog信號通路的活化，抑制纖維化；而HUC-MSC分泌的外泌體可以逆轉細胞形態和TGF-β1誘導的EMT進程，減弱肝纖維化。組織提取試劑盒產品標準外泌體通過內體途徑分泌到細胞外空間，并將各種生物活性分子（貨物）轉運至靶細胞。

外泌體介導中流耐藥性:中流細胞來源的外泌體中某些miRNAs和non-codingRNAs(lncRNA)的變化在中流化療抗藥性的發生中起重要作用。Qu等研究發現lncRNA可以通過競爭性結合miR-34/miR-449，促進晚期腎細胞ai細胞中的跨膜受體酪氨酸激酶anexelekto(AXL)和tyrosine[1]proteinkinaseMet(c-MET)表達，引發舒尼替尼耐藥。而外泌體能夠將這一lncRNA運輸至舒尼替尼敏感的ai細胞，從而傳播舒尼替尼的抗性。外泌體中的miR21能夠抑制卵巢ai細胞凋亡，并通過結合肌動蛋白絲相關蛋白凋亡酶激huo因子(apoptoticproteaseactivatingfactor1，APAF1)使得卵巢ai細胞產生對紫杉醇的抗藥性。

除運輸藥物進行疾病zhiliao之外，外泌體還能進行免疫zhiliao，外泌體免疫zhiliao和載藥zhiliao。進行免疫調節時，外泌體通常運載TGF-β1、粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)或MAGE抗原等物質。在這些研究中，分泌外泌體的母代細胞往往選用具有很好抗原遞呈(antigenpresentation)能力的樹突細胞或者中流細胞。Cao等采用鼠B淋巴瘤細胞作為母代細胞，通過熱處理的方式使淋巴瘤細胞分泌的外泌體含有更多的熱休克蛋白(HSP60和HSP90)和其他一些刺激免疫的分子，如主要組織相容性復合物(MHC-I和MHC[1]II)以及CD40、CD86等，與未熱處理的鼠B淋巴瘤細胞分泌的外泌體相比，熱處理后分泌的外泌體可以增強對T細胞的激huo能力，從而增強這種基于外泌體的疫苗的抗中流能力。隨著今后的研究發展，外泌體功能逐步清晰，并擴大臨床應用。

瘤在生長過程中會不斷地將外泌體釋放到周圍環境中去，同時，外泌體能在4℃保存96h，或是在-70℃下保存更長時間，可以從患者的體液中分離外泌體用于早期臨床診斷。隨著技術的進步，已經有生物公司嘗試涉足外泌體領域，外泌體中存在黑色素瘤標志物包括MIA、S100B和酪氨酸酶相關蛋白，且黑色素瘤患者胞外體中MIA和S100B濃度顯著高于健康人群和非黑色素瘤患者，通過檢測MIA和S100B表達水平對黑色素瘤的診治具有積極地參照作用。從本質上說，液態活檢是分子診斷在樣本來源上的延伸，進一步豐富了檢測手段，而隨著外泌體的不斷揭秘，相信其會在液態活檢中發揮越來越重要的作用。血液中的成纖維細胞所釋放的外泌體，可以促進角質形成細胞的移動和增殖以及血管新生來促進傷口愈合。外泌體細胞

外泌體鑒定方法從物理特征到表面分子標志物，多角度進行鑒定。外泌體定量

外泌體的生物發生途徑主要包括三個關鍵的檢查點：ILV的形成，阻止MVEs的降解以及MVEs和細胞膜的融合，這三個檢查點都包含在內體相關的囊泡運輸過程中。RABGTPase定位到特定膜結構的表面，通過招募效應因子來調節相應膜結構的囊泡運輸，例如，在內體溶酶體運輸網絡中，RAB5調節早期內體的形成及相互融合；內體膜上RAB5到RAB7的轉換調節早期向晚期內體的轉變；RAB7調節晚期內體/MVEs與溶酶體的融合來降解ILVs；RAB27調節MVEs與細胞膜的對接和融合來釋放ILVs形成外泌體。內吞的膜蛋白，特別是受體酪氨酸激酶家族的表皮生長因子受體，定位到內體和MVEs，通過MVEs和溶酶體融合來進入溶酶體降解，此過程受多種RABGTPases和ESCRT復合體的調控。外泌體定量

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