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細胞上清外泌體芯片

來源: 發布時間:2023-06-20

外泌體的提取方法:免疫磁珠法,這種方法可以保證外泌體形態的完整,特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設備,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,不便進行下一步的實驗。PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態完整,純度較高。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細胞共培養和體內注射。PS法可提取相當高純度的外泌體。色譜法,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設備,應用不寬泛。外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型。細胞上清外泌體芯片

細胞上清外泌體芯片,外泌體提取試劑盒

目前市面上開發的外泌體提取試劑盒,是根據外泌體表面由類似于細胞膜的脂質雙分子層具有一定疏水性這一特性,用試劑捆綁水分子,從而可通過常規離心收集沉淀獲取外泌體。這種快速提取外泌體的方法雖簡便快捷、樣本需求少、對設備要求低,但與差速離心方法類似,其分離得到的沉淀包含其他細胞分泌的囊泡,且血清中含有大量血清蛋白分子,成分復雜,很可能摻雜一些未知的疏水大分子物質。Sabapatha等曾根據來源于胎盤的外泌體表面特異表達這一特性,使用耦合到磁珠的抗抗體,采用磁珠分選方法分離血漿中胎盤來源外泌體。此法可以提取的胎盤外泌體量少,不適用于大規模提取制備,且免疫磁珠價格昂貴,不利于提取技術的普及。江西CD9外泌體慢病毒包裝臨床前研究的證據表明干細胞釋放的外泌體可作為心肌修復的潛在無細胞治理劑。

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外泌體(exosomes)是一類由細胞分泌到胞外的囊泡。與其他兩種胞外囊泡(微囊泡和凋亡小體)相比,外泌體在產生方式、尺寸、密度和內容物等方面存在明顯差異。不同于微囊泡“出芽”的形成方式,外泌體主要通過胞吐過程釋放至細胞外:首先細胞膜向內凹陷形成早期核內體(earlyendosomes),早期核內體進一步內陷形成多泡體(multivesicularbodies,MVBs),其中一部分多泡體與溶酶體(lysosome)融合,進而降解;另一部分與細胞膜融合,將其內部所包含的囊泡釋放至胞外,即為外泌體。外泌體具有獨特的物理化學性質,其直徑為30~200nm,密度為1.13~1.19g/mL,組成包括細胞來源相關的脂質、蛋白質、RNA、DNA等物質,在其表面連接有大量的糖鏈,如甘露糖、聚乳糖胺和α2,6-唾液酸等。

外泌體中包含的mRNAs和miRNAs在進入受體細胞后仍具有翻譯蛋白質、促進病毒感ran等功能。據估計,單個外泌體含有約≤100拷貝數的蛋白質和≤10000拷貝數的核苷酸。不同細胞來源的外泌體中既包含與細胞形成、結構和物質轉運相關的共有成分,也包含與來源細胞的生物功能相關的特異分子。如B淋巴細胞、樹突狀細胞、肥大細胞和腸上皮細胞來源的外泌體含有大量的主要組織相容性復合體蛋白質MHCclassⅡ和MHCclassⅠ,血小板和T細胞來源的外泌體則包含諸如血管性血友病因子、穿孔素和顆粒酶等特殊蛋白質,而ai細胞來源的外泌體表面可能含有中流特異的蛋白質分子。這類特異分子在外泌體介導細胞信號轉導、參與生理病理過程中發揮至關重要的作用。外泌體其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。

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利用抗ai癥藥物進行中流zhiliao是抑制中流的一個重要方法,不過目前抗ai癥藥物的運載存在著種種挑戰,主要體現在以下幾點:(1)抗ai癥藥物的疏水性;(2)抗ai癥藥物的毒性以及非靶向性;(3)易被人體清chu,體內循環的半衰期很短等。采用外泌體運輸抗ai癥藥物,可以提高藥物體系的水溶性,降低藥物對人體的毒性以及避免被網狀內皮系統捕捉從而延長其循環時間。近期,兩種抗ai癥藥物———紫杉醇(PTX)和阿霉素(DOX)已經成功被載入外泌體中,并對其抗中流作用進行了研究。高濃度集聚誘導細胞死亡的TNF-α,可使類風濕關節炎惡化。asce外泌體

外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。細胞上清外泌體芯片

外泌體在神經系統中與神經回路的控制相關,同時各種神經退行性疾病的致病蛋白還可以通過外泌體釋放到細胞外并傳遞到其他細胞,與病情發展密切相關。病細胞釋放的外泌體含有許多與血管新生和免疫逃逸相關的分子,構建適合病細胞生長的微環境,促進病細胞的發展。另外,病細胞來源的外泌體上粘著分子的表達形式決定著癥狀向身體部位的轉移途徑。近,有報告指出脂肪細胞釋放的外泌體對肝臟的遺傳基因表達有控制作用。許多病毒利用外泌體的產生路徑傳播細胞,受病毒傳播的細菌和寄生蟲通過外泌體控制其他受細胞傳播的細菌、寄生蟲的活動。細胞上清外泌體芯片

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