ELISA與WB的原理一樣，在抗體包被的微孔板中加入待測樣品、封閉、一抗孵育，洗滌后加入酶標待測物形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，徹底洗滌后加顯色劑并用酶標儀測定吸光值，結尾用標準曲線計算外泌體表達量。ELISA能實現對外泌體特異性蛋白的定量。其他外泌體鑒定方法還有微流體測定法和外泌體蛋白質組學分析等。由于外泌體在各種生命過程中的重要作用及其作為疾病生物標志物和藥物輸送系統的潛力，人們對此領域的興趣越來越高。盡管目前在技術上取得了長足的進步，但尚未建立對外泌體進行準確和標準化鑒定以及定量的方法，關于外泌體的量應由囊泡顆粒的數量、囊泡蛋白的量或囊泡數與蛋白之比來定義仍存在比較多爭論。建立外泌體分離、表征以及效價測定的標準化方法將是外泌體作為診斷和診療用途之前需要解決的問題。外泌體膜中有膜轉運融合蛋白annexins、RAN、GTPases。杭州CD63外泌體慢病毒包裝

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法，這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時發現外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統一的鑒定標準，也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心，這種操作簡單、省時，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準備工作繁雜，耗時，量少。外泌體p5代外泌體研究使用血漿樣本進行實驗較好。

酶聯免疫吸附測定（ELISA）：將其中一種針對外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上，將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中，由于抗體-抗原相互作用，表達抗原的外泌體將被捕獲固定在板上。將未捕獲的樣品內容物洗掉，并使用另一種抗體檢測固定的外泌體。ELISA已用于從尿液、血漿和血清中分離出外泌體，當使用標準液（已知外泌體的量）創建標準曲線時，甚至可以進行定量。但是，此方法需要通過超速離心或超濾對樣品進行預處理。同樣，流場-流分離與紫外線分析儀和光散射檢測器相結合已被用于分析外泌體的大小和純度。

流式細胞技術是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標志物CD63、CD81等相應抗體進行標記，可用流式細胞儀檢測到陽性表達，從而實現對外泌體的定量。但流式細胞技術檢測時需要單顆粒懸浮液，當外泌體濃度高或分離過程中發生外泌體囊泡聚集時將導致一次觀察到多個顆粒，從而導致數據不準確。因此，為了通過流式細胞儀觀察，需要將外泌體通過免疫捕獲或共價結合固定在磁珠表面上，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預期在外泌體表面表達的抗原的熒光偶聯抗體中。在流式細胞術之前，可在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯的外泌體囊泡。當樣品通過流式細胞儀時采集熒光信號，不只可以對外泌體進行高通量分析，還可以基于抗原表達對外泌體進行定量或分類。外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細胞膜上的受體結合，從而活躍細胞內的信號通路。

流式細胞技術是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法，其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升。將外泌體表面特異性標志物CD63、CD81等相應抗體進行標記，可用流式細胞儀檢測到陽性表達，從而實現對外泌體的定量。但流式細胞技術檢測時需要單顆粒懸浮液，當外泌體濃度高或分離過程中發生外泌體囊泡聚集時將導致一次觀察到多個顆粒，從而導致數據不準確。因此，為了通過流式細胞儀觀察，需要將外泌體通過免疫捕獲或共價結合固定在磁珠表面上，從而便于將外泌體囊泡暴露于已知或者預期在外泌體表面表達的抗原的熒光偶聯抗體中。在流式細胞術之前，可以在落射熒光顯微鏡（EPI）下觀察與磁珠和熒光抗體偶聯的外泌體囊泡。當樣品通過流式細胞儀時采集熒光信號，不只可以對外泌體進行高通量分析，還可以基于抗原表達對外泌體進行定量或分類。外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。隨著外泌體研究的不斷深入，它的應用已經涉及醫學基礎和免疫領域、寄生蟲領域。外泌體miRNA測序

外泌體的納米球膜型結構由雙層脂質形成。杭州CD63外泌體慢病毒包裝

外泌體的提取分離方法：1、PEG-base沉淀法：聚乙二醇（PEG）可與疏水性蛋白和脂質分子結合共沉淀，早先應用于從血清等樣本中收集病毒，現在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結合游離水分子有關。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一，產生難以去除的聚合物，機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等，因此發表文章時易受質疑。2、試劑盒提取：近幾年來，市場上已出現各種商業化的外泌體提取試劑盒，有的是通過特殊設計的過濾器過濾掉雜質成分，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進行分離純化，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來。杭州CD63外泌體慢病毒包裝

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