外泌體的提取分離方法：1、PEG-base沉淀法：聚乙二醇可與疏水性蛋白和脂質(zhì)分子結(jié)合共沉淀，早先應(yīng)用于從血清等樣本中收集病毒，現(xiàn)在也被用來(lái)沉淀外泌體，其原理可能與競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合游離水分子有關(guān)。利用PEG沉淀外泌體存在不少問(wèn)題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽(yáng)性），顆粒大小不均一，產(chǎn)生難以去除的聚合物，機(jī)械力或者吐溫-20等化學(xué)添加物將會(huì)破壞外泌體等，因此發(fā)表文章時(shí)易受質(zhì)疑。2、試劑盒提取：近幾年來(lái)，市場(chǎng)上已出現(xiàn)各種商業(yè)化的外泌體提取試劑盒，有的是通過(guò)特殊設(shè)計(jì)的過(guò)濾器過(guò)濾掉雜質(zhì)成分，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進(jìn)行分離純化，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來(lái)。外泌體產(chǎn)生于細(xì)胞中的多泡體。血漿外泌體提取試劑盒廠家

外泌體較有用的特性之一是它們穿過(guò)屏障（如細(xì)胞質(zhì)膜和血/腦屏障）的能力。這使它們成為理想的診療傳遞分子。外泌體由于其天然的材料運(yùn)輸特性，固有的長(zhǎng)期循環(huán)能力和出色的生物相容性而具有比較大的潛力成為藥物遞送載體，其適合于遞送各種化學(xué)物質(zhì)，蛋白質(zhì)，核酸和基因診療劑。（1）外泌體作為小分子的藥物傳遞載體：關(guān)于外泌體遞送姜黃素，多巴胺，PTX和DOX等化學(xué)診療藥物的報(bào)道已有充分文獻(xiàn)記載。（2）外泌體作為蛋白質(zhì)的藥物遞送載體：已經(jīng)發(fā)現(xiàn)外泌體可遞送多種蛋白質(zhì)，例如酶，細(xì)胞骨架蛋白質(zhì)和跨膜蛋白質(zhì)。（3）外泌體作為核酸的藥物遞送載體：研究表明，外泌體天然的可以攜帶遺傳（例如miRNA，siRNA）到靶細(xì)胞中，從而在生物學(xué)和致病過(guò)程中誘導(dǎo)遺傳修飾。外泌體的這些特征已成為涉及遺傳療法和使用外泌體進(jìn)行研究的主要策略。外泌體mirna提取試劑盒推薦建立外泌體分離、表征以及效價(jià)測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)化方法將是外泌體作為診斷和診療用途之前需要解決的問(wèn)題。

血漿中的外泌體蛋白既可以當(dāng)作標(biāo)志物，也可以進(jìn)行機(jī)理研究？首先，研究人員將慢性淋巴瘤（CLL）患者分為2個(gè)亞組：疾病進(jìn)展期和疾病慢性期。然后利用質(zhì)譜技術(shù)分析了患者血漿外泌體蛋白組，發(fā)現(xiàn)S100-A9蛋白在進(jìn)展期CLL患者中明顯高表達(dá)，可以作為CLL進(jìn)展期診斷的輔助標(biāo)志物。進(jìn)一步，研究人員通過(guò)生信分析發(fā)現(xiàn)進(jìn)展期CLL患者外泌體中的高表達(dá)蛋白質(zhì)主要與炎癥和氧化應(yīng)激有關(guān)，而NF-κB通路正是承接此效應(yīng)的關(guān)鍵通路。通過(guò)從進(jìn)展期CLL患者中分離富含S100-A9蛋白的外泌體加入CLL患者的PBMC細(xì)胞中，證實(shí)了S100-A9+外泌體能夠明顯促進(jìn)進(jìn)展期CLL患者PBMC細(xì)胞中IκBα蛋白的磷酸化上調(diào)，進(jìn)一步活躍NF-κB通路。該研究證通過(guò)血漿外泌體蛋白組分析不只找到輔助診斷進(jìn)展期CLL的標(biāo)志物，并證實(shí)了S100-A9+外泌體可通過(guò)形成正向反饋調(diào)控，不斷活躍進(jìn)展期CLL患者自身PBMC細(xì)胞中的NF-κB通路，促進(jìn)CLL進(jìn)展的特殊機(jī)理。

NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一，相較于其他表征方式NTA技術(shù)的樣本處理更簡(jiǎn)單、更能保證外泌體原始狀態(tài)、檢測(cè)速度更快。大致方法是：將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀，用激光光束穿過(guò)樣本，激光在腔室內(nèi)與顆粒相互作用時(shí)會(huì)發(fā)生散射，通過(guò)裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光，捕捉外泌體的布朗運(yùn)動(dòng)，實(shí)現(xiàn)顆粒可視化。然后使用Stokes-Einstein方程來(lái)測(cè)量粒子的平均速度，繼而估算粒子的大小。NTA能夠測(cè)量粒徑10-1000nm之間的顆粒，包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍，但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優(yōu)化的數(shù)據(jù)收集和分析參數(shù)，另外，NTA比較難區(qū)分與外泌體具有相似布朗運(yùn)動(dòng)的蛋白質(zhì)聚集體，因此無(wú)法排除其他物質(zhì)的干擾。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。

外泌體是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡，其大小為30-150nm，具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài)，含有豐富的內(nèi)含物（包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等），參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，包括血液、唾液、尿液、乳汁等，同時(shí)也存在于組織樣本中，如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。所有的細(xì)胞都能分泌外泌體，但是不同細(xì)胞分泌的外泌體不管在數(shù)量上還是在內(nèi)含物中都具有比較大的差異性，這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣。外泌體普遍參與細(xì)胞間物質(zhì)運(yùn)輸與信息傳遞，調(diào)控細(xì)胞生理活動(dòng)。同時(shí)，外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸、誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化、促進(jìn)瘤子發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用；此外，外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來(lái)進(jìn)行藥物遞送。外泌體的膜蛋白有可能與細(xì)胞膜蛋白作用，活躍細(xì)胞內(nèi)通路。外泌體可以將PD-L1轉(zhuǎn)運(yùn)至其他PD-L1表達(dá)低或沒(méi)有PD-L1的細(xì)胞，并可能與PD-1結(jié)合。血漿外泌體提取試劑盒應(yīng)用

外泌體內(nèi)容物的進(jìn)入或外泌體信號(hào)的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)或融合。血漿外泌體提取試劑盒廠家

外泌體的來(lái)源與特征：外泌體是一種存在于細(xì)胞外的多囊泡體，通過(guò)細(xì)胞內(nèi)吞泡膜向內(nèi)凹陷形成，其大小均一，直徑為40-100nm，密度為1.10-1.18g/mL。外泌體可由間充質(zhì)干細(xì)胞、淋巴細(xì)胞和腫細(xì)胞細(xì)胞等多種類(lèi)型細(xì)胞主動(dòng)分泌釋放。外泌體內(nèi)主要含有核酸、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等，可作為疾病診斷標(biāo)記物、調(diào)控靶細(xì)胞功能、參與細(xì)胞生物學(xué)活動(dòng)等。例如：含有miR-140-5p的滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生；骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞來(lái)源外泌體攜帶的miR-196a可調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞分化促進(jìn)大鼠顱骨缺損的骨再生。外泌體顯示出了在診療各種疾病（如心肌病和神經(jīng)病）方面的潛力。血漿外泌體提取試劑盒廠家

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