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臍帶血外泌體

來源: 發布時間:2023-03-16

被特定部位的細胞獲取的瘤子外泌體可為腫細胞的轉移準備轉移前微環境。用肺轉傾向的腫細胞細胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉傾向的腫細胞細胞重新定向。外泌體的蛋白質組學分析發現不同部位傾向性的腫細胞細胞來源的外泌體具有不同的整合素(integrin)表達譜,整合素α6β4和α6β1與肺轉有關,而整合素αvβ5與肝轉有關。敲低整合素α6β4和αvβ5可減少外泌體被靶部位細胞獲取,進而分別降低了肺和肝的轉移。進一步研究發現外泌體整合素被細胞獲取后活躍了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表達。通過臨床數據分析顯示外泌體整合素可作為預測腫細胞轉移的部位傾向性的診斷指標。外泌體的提取的方式:PS親和法。外泌體普遍參與細胞間物質運輸與信息傳遞,調控細胞生理活動。臍帶血外泌體

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PEG沉淀法分離外泌體:通常通過將無水聚合物,如聚乙二醇(PEG),與樣品混合來沉淀外泌體。PEG聚合物競爭性結合水分子,增加疏水性蛋白和脂質分子的相互結合力從而沉淀外泌體,然后通過離心分離外泌體。這種分離的方法快速,簡便,可用于各種起始體積(從100μL到幾毫升)適合于各種研究和臨床設定。然而,這種方法缺乏選擇性,PEG聚合物不只會導致外泌體小泡沉淀,還會引起其他細胞外囊泡、細胞外蛋白質和蛋白質聚集體沉淀。因此,在使用這種方法之前,必須進行樣品預處理,例如過濾或超速離心,以減少較終的外泌體制劑的污染。外泌體提取試劑盒生產廠家選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。

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外泌體是分泌的細胞外囊泡的主要群體,是具有生物活性的脂雙層囊泡,大小約為30-100nm,由不同類型的正常細胞和瘤子細胞自然產生和釋放。這些囊泡在細胞間通訊中起重要作用,并影響細胞外環境和免疫系統反應。外泌體通過內體途徑分泌到細胞外空間,并將各種生物活性分子(貨物)轉運至靶細胞。外泌體貨物的組成非常多樣化,包括各種免疫阻止和免疫刺激蛋白、趨化因子、細胞因子、細胞受體、脂質以及不同的核酸,例如miRNA和環狀RNA。

免疫印跡或蛋白質印跡是分析外泌體較常用的方法之一,其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結合。首先對樣品進行處理將囊泡裂解并將蛋白質變性,變性后,通過SDS-PAGE分離蛋白質,然后將其轉移到硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上并暴露于針對目的抗原的抗體中。抗體特異性識別膜表面上的抗原,然后將膜暴露于第二抗體中。通過二抗的熒光標簽或與二抗偶聯的辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶基團進行檢測。常用的標記蛋白為CD63、CD81、TSG101和ALIX等。但是此方法的特異性和重復性會受到所用抗體質量的限制。外泌體可由間充質干細胞、淋巴細胞和腫細胞細胞等多種類型細胞主動分泌釋放。

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血漿中的外泌體蛋白既可以當作標志物,也可以進行機理研究?首先,研究人員將慢性淋巴瘤(CLL)患者分為2個亞組:疾病進展期和疾病慢性期。然后利用質譜技術分析了患者血漿外泌體蛋白組,發現S100-A9蛋白在進展期CLL患者中明顯高表達,可以作為CLL進展期診斷的輔助標志物。進一步,研究人員通過生信分析發現進展期CLL患者外泌體中的高表達蛋白質主要與炎癥和氧化應激有關,而NF-κB通路正是承接此效應的關鍵通路。通過從進展期CLL患者中分離富含S100-A9蛋白的外泌體加入CLL患者的PBMC細胞中,證實了S100-A9+外泌體能夠明顯促進進展期CLL患者PBMC細胞中IκBα蛋白的磷酸化上調,進一步活躍NF-κB通路。研究證通過血漿外泌體蛋白組分析不只找到輔助診斷進展期CLL的標志物,并證實了S100-A9+外泌體可通過形成正向反饋調控,不斷活躍進展期CLL患者自身PBMC細胞中的NF-κB通路,促進CLL進展的特殊機理。1983年,外泌體初次于綿羊網織紅細胞中被發現。凱杰外泌體提取試劑盒

人體內多種細胞及體液均可分泌外泌體,包括內皮細胞、免疫細胞、血小板、平滑肌細胞等。臍帶血外泌體

外泌體作為細胞間信使較早發現于體外培養的綿羊紅細胞上清液中,是直徑為30~150nm,密度為1.10~1.18g/ml的細胞外囊泡,攜帶豐富的遺傳信息,參與細胞信號轉導、細胞遷移、瘤子新生血管生長和瘤子微環境形成等過程。由于現存的分離技術是基于外泌體的大小、結構和膜蛋白的親和捕獲,比較難完全將其與其他囊泡和大分子蛋白質復合體區分開,分離出的外泌體蛋白濃度通常會被高估,并且不同亞型外泌體之間可能會有不同蛋白質特征,所以對分離的外泌體進行鑒定對于后期研究至關重要。臍帶血外泌體

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