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吉林外泌體脂質組學

來源: 發布時間:2023-03-11

外泌體是分泌的細胞外囊泡的主要群體,是具有生物活性的脂雙層囊泡,大小約為30-100nm,由不同類型的正常細胞和瘤子細胞自然產生和釋放。這些囊泡在細胞間通訊中起重要作用,并影響細胞外環境和免疫系統反應。外泌體通過內體途徑分泌到細胞外空間,并將各種生物活性分子(貨物)轉運至靶細胞。外泌體貨物的組成非常多樣化,包括各種免疫阻止和免疫刺激蛋白、趨化因子、細胞因子、細胞受體、脂質以及不同的核酸,如miRNA和環狀RNA。外泌體可以通過多種方法給藥,靜脈內給藥是較常用的途徑。外泌體在免疫調控、肉瘤轉移和血管生成以及生物標志物等領域發揮著非常重要的作用。吉林外泌體脂質組學

吉林外泌體脂質組學,外泌體提取試劑盒

外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調節外泌體膜與受體細胞的融合,有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現在早期以及回收的核內體中,RAB7和RAB9主要出現在晚期的核內體。現有大量的研究發現外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白,外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯蛋白(包括膜聯蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌體膜上富含參與外泌體運輸的四跨膜蛋白家族(CD63,CD81和CD9))、熱休克蛋白家族((HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細胞特異性的蛋白包括A33(結腸上皮細胞來源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源)、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素。干細胞外泌體示蹤提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態學(電子顯微鏡技術)、粒子大小以及標志蛋白等方式實現的。

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外泌體的提取、純化和鑒定:每一個外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體,并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。另外利用外泌體自身的物理化學性質所研發的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態學(電子顯微鏡技術)、粒子大小以及標志蛋白等方式實現的。近來的研究發現外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用,如免疫中抗原呈遞、瘤子的生長與遷移、組織損傷的修復等。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,可作為疾病診斷的生物標志物。外泌體具有脂質雙層膜結構,能比較好的保護其包被的物質,且能靶向特定細胞或組織,因此是一種比較好靶向給藥系統。

外泌體遞送藥物的優勢:許多新的候選藥物(例如蛋白質和核酸)在體內環境中高度不穩定,對診療結果的效果提出了重大挑戰。鑒于與許多當前的納米微粒遞送系統相關的問題,外泌體作為“自然的遞送系統”允許遞送這些生物分子。由于外泌體體積小和其本身就是細胞產物,通過外泌體遞送藥物可以避免巨噬細胞的吞噬作用或降解,還可以在體內長時間循環,保持效果。其中,外泌體能夠穿過血腦屏障以將特定藥物輸送到中樞的神經系統是外泌體遞送藥物的一個明顯優勢。外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。外泌體普遍存在于細胞培養上清以及各種體液中,包括血液、唾液、尿液、乳汁等。

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NTA技術已被作為外泌體表征手段之一,相較于其他表征方式NTA技術的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態、檢測速度更快。大致方法是:將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀,用激光光束穿過樣本,激光在腔室內與顆粒相互作用時會發生散射,通過裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光,捕捉外泌體的布朗運動,實現顆??梢暬H缓笫褂肧tokes-Einstein方程來測量粒子的平均速度,繼而估算粒子的大小。NTA能夠測量粒徑10-1000nm之間的顆粒,包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍,但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優化的數據收集和分析參數,另外,NTA比較難區分與外泌體具有相似布朗運動的蛋白質聚集體,因此無法排除其他物質干擾。外泌體中含有核酸,包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA。sbi外泌體

外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸、誘導正常細胞轉化、促進瘤子發生和轉移等作用。吉林外泌體脂質組學

近年來,外泌體的捕獲技術越來越多,微流體系也被用于外泌體提取,此方法能根據其物理和生化特性同時分離外泌體。采用這種方法獲得的樣品純度高,且可及時獲取外泌體用于疾病的相關檢測。在初次注射時外泌體粘附在微流控設備的內表面,并在隨后的PBS注射中沖洗掉。此方法采用的設備復雜,所需的樣本量取決于流動通道的長度。另外,樣品量的注入速率比較低,因此,對于大樣品量,將需要較長的處理時間。外泌體在包括瘤子在內的各種疾病的發病機理中具有重要的功能。目前,研究人員已開發了多種方法來分離外泌體,離心技術仍然是常用方法,其他方法,例如過濾、磁珠分離和色譜法等,也顯示出獨特的優勢,但目前仍然沒有一種公認有效的提取方法,研究人員應針對不同來源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案。吉林外泌體脂質組學

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