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外泌體是粉色的還是透明的

來源: 發布時間:2023-02-22

密度梯度離心法根據在蔗糖、碘海醇或碘克沙醇等惰性溶液中的浮力密度將外泌體分成特定的層,目前普遍應用的是蔗糖,這種方法可以成功地將亞細胞成分(例如過氧化物酶體,線粒體和核內體)分離到密度梯度溶液中的不同層中。樣品被放置在梯度的頂部,當施加離心力時,樣品中的顆粒以獨特的速率通過梯度,該梯度以從上到下的密度增加。樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集,隨后可以通過分餾收集,密度梯度超速離心對從蛋白質聚集體和非膜顆粒中分離出外泌體非常有效。此方法獲得的外泌體純度較高,但步驟繁瑣、費時且會造成外泌體損失。通過臨床數據分析顯示外泌體整合素可作為預測腫細胞轉移的部位傾向性的診斷指標。外泌體是粉色的還是透明的

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NTA技術已被作為外泌體表征手段之一,相較于其他表征方式NTA技術的樣本處理更簡單、更能保證外泌體原始狀態、檢測速度更快。大致方法是:將分離的外泌體樣本注入納米顆粒追蹤分析儀,用激光光束穿過樣本,激光在腔室內與顆粒相互作用時會發生散射,通過裝有攝像頭的顯微鏡收集散射光,捕捉外泌體的布朗運動,實現顆??梢暬H缓笫褂肧tokes-Einstein方程來測量粒子的平均速度,繼而估算粒子的大小。NTA能夠測量粒徑10-1000nm之間的顆粒,包含了外泌體50-150nm的徑粒范圍,但是NTA鑒定需要大于0.5毫升的樣品體積以及優化的數據收集和分析參數,另外,NTA比較難區分與外泌體具有相似布朗運動的蛋白質聚集體,因此無法排除其他物質干擾。浙江CD9外泌體慢病毒超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法。

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AFC自動收集器是將qEV分離法這一過程自動化的儀器,將用來收集外泌體樣本的微量離心管放置在AFC的中間轉盤內,根據稱重精確測量流體體積,可精確的測量到樣品中每一個液滴的重量并精確測量總重量。將在空隙體積之前從qEV柱洗脫的流體收集到AFC轉盤的單獨中心孔中并送至廢液桶,避免將不需要的空隙部分收集到微量離心管中。在提取期間,當達到設定的提取體積后,轉盤會自動旋轉到下一個微量離心管繼續收集,到收集完成后自動停止。微滴式數字PCR技術不佳有效提高了核酸分子的擴增效率,而且由于采用微滴計數的方法進行定量,可以不依賴與RT-PCR的熒光信號和Ct值,對所測樣品中的核酸分子進行一定定量。

外泌體的臨床應用:間充質干細胞是目前較普遍使用的細胞類型,它具有自我更新,多向分化、分泌細胞因子和細胞外囊泡體、免疫調節、來源普遍等特點,在臨床診療中取得了良好的成果。間充質干細胞來源外泌體與間充質干細胞有著相似的功能,包括修復與再生組織、阻止炎癥反應及調節機體免疫,但外泌體相對于間充質干細胞又有許多優勢。首先,間充質干細胞來源外泌體更穩定,更好保存,易于管理和控制,可以人為改變其內容物的種類和數量。其次,它們沒有活細胞,不會像間充質干細胞那樣可能會過多增殖而放大療效或者病變導致疾病加重;另外,它有可能避免某些針對間充質干細胞的調控問題,間充質干細胞來源外泌體有代替間充質干細胞的趨勢。干細胞外泌體攝取流式細胞技術是細胞和小顆粒定性和定量表征的有效方法,其用于外泌體定量檢測的準確性也在不斷上升。膜受體的識別是外泌體細胞反應的基礎,它可能活躍受體并隨后導致相關信號通路的活躍。

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質膜的連續內陷較終導致多泡體的形成,多泡體可與細胞內的其他囊泡和細胞器交叉,從而增加了外泌體成分的多樣性。根據細胞來源的不同,細胞外囊泡,包括外泌體,可以包含細胞的許多成分,包括DNA、RNA、脂質、代謝物、胞質和細胞表面蛋白。目前產生外泌體的生理目的尚不清楚,需要進一步研究。一個推測的作用是外泌體可能從細胞中去除多余和/或不必要的成分以維持細胞內環境的穩定。較近的研究也表明外泌體中特定細胞成分的功能、靶向、機制驅動的積累,提示它們在調節細胞間通訊中發揮作用。外泌體較有用的特性之一是它們穿過屏障(如細胞質膜和血/腦屏障)的能力。河南海洋生物外泌體

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當外泌體在1980年初次被發現后,其被認為是細胞排泄廢物的一種方式,如今隨著大量對其生物來源、其物質構成及運輸、細胞間信號的傳導以及在體液中的分布的研究發現外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細胞類型,其可參與到機體免疫應答、抗原提呈、細胞遷移、細胞分化、肉瘤侵襲等方方面面。有研究表明肉瘤來源的外泌體參與到肉瘤細胞與基底細胞的遺傳信息的交換,從而導致大量新生血管的生成,促進了肉瘤的生長與侵襲。外泌體是粉色的還是透明的

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