HE染色常見問題：切片染色不均勻，有片狀的弱著**存在答：（1）取材時組織太厚，固定過久，導致深部組織固定不佳，而表淺組織過度固定，而透明、脫水、浸蠟均是如此，這樣在后期染色時就會出現染色不均勻。應該將厚的組織剖開固定。（2）制片過程有問題，切片厚薄不一，或者有刀痕，或組織與玻片間存在氣泡。同一張切片厚薄不一，一般都是在制片時，刀片固定不佳或刀片鈍或刀片與組織角度不佳（一般比較好角度為5°）（3）脫蠟前未烘烤，脫蠟時間過短或脫蠟液使用過久，導致脫蠟不徹底。（4）染色液過少，著色不均勻；或染色時部分組織干涸而另一部分濕潤，這樣會導致組織吸附染料的能力不一。（5）分化不當。南京英瀚斯，專業的病理染色實驗服務平臺。南京英瀚斯，專業的技術提供專業的HE染色服務。安徽值得信賴的HE染色分析

HE染色伊紅溶液中加入少量的冰醋酸(一般小于10%就行)，可改變組織等電點，促進伊紅與胞漿蛋白質結合，其本身不參與染色的反應。當蘇木素染色效能極高，很短時間就導致核漿共染時，可適當地添加冰醋酸(一般不超過2%)，抑制蘇木素染色效能，方便控制染色時間，同時也能提高蘇木素染色的清晰度。現在有商用的HE染色液賣，但是質量參差不齊。如果課題組較大，完全可以自己配制，效果也挺好。配制為乙酸濃度5%-7.5%和鹽酸濃度為0.5%-1%的蘇木素溶液放置一周，即可完全成熟，染色效果好，氧化膜和結晶都很少(一般蘇木素中酸度越低越容易產生氧化膜和結晶，這也是提示更換蘇木素的標志之一)。甘肅專業的HE染色分析常用HE染色試劑配制方法。

HE染色原理：一、細胞核染色原理：蘇木精為堿性天然染料，可使細胞核著色。細胞核內染色質的成分主要是DNA，在DNA的雙螺旋結構中，兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外。使DNA雙螺旋的外側帶負電荷，呈酸性，很容易與帶正電荷的蘇木精堿性燃料以離子鍵或氫鍵結合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍色，所以細胞核被染成藍色。二、細胞漿染色原理：細胞漿內主要成分是蛋白質，為兩性化合物、細胞漿的染色與pH值有密切關系，當pH調到蛋白質等電點4.7-5.0時，胞漿對外不顯電性，此時酸或堿性染料不易染色。當pH調到6.7-6.8時，大于蛋白質的等電點pH值，表現酸性電離，而帶負電荷的陰離子，可被帶正電荷的染料染色，現時胞核也被染色，核和胞漿難以區分。因此必須把pH調至胞漿等電點以下，在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷（陽離子），就可被帶負電荷（陰離子）的染料染色。伊紅Y是一種化學合成的酸性染料，在水中離解成帶負電荷的陰離子，與蛋白質的氨基正電荷（陽離子）結合而使細胞漿染色，細胞漿、紅細胞、肌肉、結締組織，嗜伊紅顆料等被***成不同程度的紅色或粉紅色，與藍色的細胞核形成鮮明的對比

HE染色多聚甲醛保存組織的注意事項：多聚甲醛放置過久其中的醛基可能會被氧化為酸，使溶液pH降低，從而影響染色。不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同，應當根據細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調整固定時間。多聚甲醛雖然作用溫和，但能硬化組織，固定時間過久會導致組織變脆，切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過24小時。多聚甲醛可長期存在于固定過的細胞或組織樣品中，固定完成后用適當的洗滌液或水沖洗數小時仍會有殘留，因此后續實驗結果如果受醛基影響，須盡量洗去殘留的多聚甲醛。醛基與抗原蛋白的氨基交聯形成羧甲基，使抗原決定簇的三維構象出現空間障礙。分子間交聯形成的網格結構可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇，使之不能充分暴露，可造成假陰性的染色，影響免疫組化結果。因此，4%多聚甲醛固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時，有時需要對抗原先進行修復，然后才能進行免疫染色等后續操作。骨組織HE染色的操作流程。

HE染色病理技術中**常用的一種方法，通過它可以做出病理診斷和發現尋求別的輔助方法，以達到準確，完整的病理診斷。一、染色目的 病理學的所有切片，都必須通過一種以上的染料，通過各種不同的方法，將切片中各種不同的物質，在不同染液的作用下，將其顯示出來，使之在光學顯微鏡下，能夠完全的觀看各種結構。例如，HE染色，好質量的切片可以清晰地顯示出多不同的結構，細胞核著藍黑色，細胞漿著粉紅色，軟骨著藍色等。清晰的結構為診斷提供的依據，因此，染色技術也是病理技術中的重要組成部分，必須不斷地總結，方能提高。HE染色，一站式實驗外包服務平臺。貴州靠譜的HE染色公司

HE染色，即是蘇木精-伊紅染色法，是形態學比較常用的染色方法。安徽值得信賴的HE染色分析

HE染色注意事項：1、染色時調節pH值很重要。如果組織塊在福爾馬林中固定時間長，組織酸化而影響細胞核著色。因此，要在自來水中沖洗時間長一些或在飽和碳酸鋰水溶液中處理10-30min，這樣可以使細胞核著色較深。染伊紅時胞漿著色不佳，可在伊紅溶液中滴加1-2滴冰醋酸。2、切片染蘇木精后，分色這一步是關鍵，應在顯微鏡下控制進行，一般以細胞核染色清楚（晰）而細胞質基本無色為佳。如果過分延長分色時間將導致染色太淺，應重新染色后再行分色。3、切片經酒精脫水后，入二甲苯時可出現白色不透明狀態，此為脫水不徹底，應將切片退回無水酒精，更換酒精、二甲苯，以求徹底脫水與透明。4、在染色過程中不要讓切片干燥，以免切片收縮、變形，影響神經元形態。5、切片從二甲苯取出或進入二甲苯前，切片周邊均應擦干凈或吸干多余水分。6、***封固時，要用中性樹脂，防止日后褪色，蓋片要選大于組織塊的面積，如漏出一部分不久將會褪色，所用樹脂濃度要適當，樹脂封固時不能有氣泡。安徽值得信賴的HE染色分析