英瀚斯生物為您整理免疫組化實驗步驟

1、石蠟切片置于65℃烘箱中烘片2h，脫蠟至水，用PBS沖洗三次，每次5min。

2、切片置于EDTA緩沖液中微波修復，中火至沸后斷電，間隔10min低火至沸。

3、自然冷卻后PBS洗3次，每次5min。4、切片放入3%過氧化氫溶液，室溫下孵育10min，以阻斷內源性過氧化物酶。

5、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）。

6、去除BSA液，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織，4℃過夜。

7、PBS洗3次，每次5min。

8、去除PBS液，每張切片加50μl-100μl相應種屬的二抗，4℃孵育50min。

9、PBS洗3次，每次5min。

10、去除PBS液，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液，顯微鏡控制顯色。

11、顯色完全后，蒸餾水或自來水沖洗，蘇木素復染，1%鹽酸酒精分化（1s），自來水沖洗，氨水返藍，流水沖洗。

12、切片經過梯度酒精（70-100%）10min一個梯度，脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。 免疫組化結果分析是什么？江蘇組織免疫組化怎么選擇

病理醫師日常工作中經常說的一句話應該就是“做個免疫組化吧”；不管是臨床醫師，還是患者，他們問的多的問題則是“為什么要做免疫組化？”病理醫師通過“特殊染色”來進行細胞的識別。這一做法的依據是特定細胞和組織中的成分不同、則化學性質不同，通過染色的方法則可以呈現不同顏色。不過，由于組織固定或儲存等，會造成相應物質的活性降低甚至消失，因而限制了特殊染色方法的應用。隨著免疫學研究的進展，根據抗原與相應抗體間特異性結合的性質，則有了現在免疫組化的方法：不同細胞、不同組織中抗原有一定差異，抗體與被測組織中的特定抗原結合，進而通過一定顯色方法將結合的抗體顯示出來。如有相應顯色，則證實可能有被測抗原；無顯色則可能無被測抗原。當然，這一方法中需注意相應的“例外”，如抗體的非特異性結合、非特異性顯色，則容易造成“假陽性”；或者雖有相關抗原、但所用抗體與該抗原并未結合等，則容易造成“假陰性”。隨著免疫組化的應用經驗的增加，這些問題在常規應用中盡量得以避免，前者如各種顯色方法的優化；后者如抗原修復方法的優化、新型抗體開發及選擇。江蘇組織免疫組化怎么選擇英瀚斯生物為您詳解免疫組化實驗指南！

免疫組化的定量分析怎么做？

免疫組化的定量分析是通過圖像分析軟件對顯色結果進行定量評估。免疫組化常用的方法有光密度分析和陽性細胞計數。光密度分析是通過測量顯**域的光密度值，評估目標蛋白的表達水平。免疫組化陽性細胞計數是通過計數顯色陽性的細胞數量，評估目標蛋白的表達水平。定量分析需要考慮多個因素，如顯色強度、背景信號和切片厚度。此外，免疫組化定量分析的結果通常只能進行半定量分析，不能提供***的定量數據。

免疫組化的抗體選擇

抗體是免疫組化實驗成功的關鍵因素之一。選擇合適的一抗需要考慮其特異性、靈敏度和適用性。特異性是指抗體只與目標蛋白結合，而不與其他蛋白發生交叉反應。靈敏度是指抗體能夠檢測低豐度的目標蛋白。適用性是指抗體適用于免疫組化實驗，而不是其他實驗（如Western blot）。此外，免疫組化實驗中還需要考慮抗體的宿主物種、克隆性和濃度。免疫組化二抗的選擇則需要考慮其與一抗的匹配性，以及是否帶有顯色或熒光標記。 英瀚斯生物，專業承接免疫組化等各類病理染色檢測！

免疫組化的結果分析：

免疫組化實驗通常需要設置陽性對照、陰性對照（或替代對照）（陽性對照是排除方法和實驗系統有無問題；陰性對照與替代對照是排除有無非特異性染色）。一般情況下，陽性對照顏色的特點為：Ag定位，包漿、胞核、胞膜、間質具有結構性。且染色的強度不同（顏色深淺不一）；陰性對照的特點為：染色細胞與組織無區別，顏色具有彌散性，分布均勻。

英瀚斯生物可承接各類病理染色，包括免疫組化。

說明：免疫組化實驗可以對結果進行定量分析，但要實驗得到的必須是高質量的染色切片，要求背景染色淺且特異性染色較深，這樣分析的結果才會比較準確。 常見的免疫組化方法有哪些？江蘇組織免疫組化怎么選擇

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免疫組化技術應用于臨床cancer良惡性的判斷，英瀚斯生物為您介紹。對于反應性增生還是cancer性增生，可用免疫球蛋白(Ig)的輕鏈抗體檢測B淋巴細胞增生的單克隆或多克隆性來區別。在濾泡反應性增生時，濾泡反應中心的細胞不表達細胞凋亡蛋白(bcl-2)，bcl-2陰性;而在濾泡性淋巴瘤中，由于90%以上cancer性濾泡細胞有bcl-2的高表達，bcl-2陽性。而增殖細胞核抗原(PCNA)，周期素(Cycling)，核抗原(Ki-67)通過對cancer細胞增生的程度作出評價，從而提示增生細胞的良惡性。江蘇組織免疫組化怎么選擇